HBV 1.3倍基因组HepG2稳转细胞模型优势单克隆株的筛选及鉴定

图1 1. 3-fold HBV基因组序列. NC_003977.2 [Hepatitis B virus (strain ayw) genome]Map(从1075bp处沿顺时针方向开始1.3倍序列, 黄色标记片段cccDNA1为重复序列). 1.3-fold HBV: 1.3倍乙型肝炎病毒.

图2 pLenti-BSD-1. 3-fold HBV慢病毒载体示意图. 蓝色标记片段为1.3-fold HBV序列; 黄色标记片段cccDNA1与cccDNA2为重复序列; 绿色标记片段为抗性筛选基因序列. BSD: 稻瘟菌素; 1.3-fold HBV: 1.3倍乙型肝炎病毒; cccDNA: 共价闭合环状DNA分子.

图3 PCR鉴定1. 3-fold HBV基因组扩增产物. 1: Marker; 2: NC对照; 3: 1.3-fold HBV基因组相关PCR产物. 1.3-fold HBV: 1.3倍乙型肝炎病毒.

图4 PCR鉴定pLenti-BSD-1. 3-fold HBV. 1: Marker; 2-7: pLenti-BSD-1.3-fold HBV基因组相关转化子; 8: 阴性对照; 9: 阳性对照(PCR扩增1.3-fold HBV). BSD: 稻瘟菌素; 1.3-fold HBV: 1.3倍乙型肝炎病毒.

图5 MOI = 30时, 慢病毒侵染HepG2细胞的感染效率(×100). A: 绿光; B: 白光.

图6 1. 3-fold HBV-HepG2稳转细胞形态图. 1.3-fold HBV: 1.3倍乙型肝炎病毒.

图7 1. 3-fold HBV-HepG2稳转细胞的PCR鉴定. 1: Marker; 2: HepG2细胞(阴性对照细胞); 3: 1.3-fold HBV-HepG2稳转细胞. 1.3-fold HBV: 1.3倍乙型肝炎病毒.

图8 HepGA14和HepG2. 2.15各代HBx相对表达量比较. 与HepG2.2.15组比较, P<0.05. HBx: 乙型肝炎病毒X蛋白.

图9 HepGA14和HepG2. 2.15各代cccDNA相对表达量比较. 与HepG2.2.15组比较, P<0.05. cccDNA: 共价闭合环状DNA分子.

图10 HepGA14和HepG2. 2.15各代HBV DNA相对表达量比较. 与HepG2.2.15组比较, ^a,bP<0.05. HBV: 乙型肝炎病毒.