miR-10a-5p敲低通过靶向THBS2抑制胃癌细胞的生长和转移

图1 miR-10a-5p在GC组织和GC细胞中表达增加. A: miR-10a-5p在癌旁正常组织和GC组织中表达水平, 与癌旁正常组织相比, ^aP<0.05, n = 10; B: miR-10a-5p在正常胃上皮细胞GES和GC细胞MGC-803和AGS中表达水平, 与GES细胞相比, ^cP<0.05, n = 3. GN: 癌旁正常组织; GC:胃癌.

图2 在胃癌细胞MGC-803和AGS中, miR-10a-5p inhibitor的转染效率鉴定. A: MGC-803细胞中; B: AGS细胞中. 与NC组相比, ^aP<0.05, n = 3.

图3 miR-10a-5p敲低抑制胃癌细胞增殖, 集落形成, 侵袭和侵袭. A, B: CCK-8法检测MGC-803细胞(A)和AGS细胞(B)的细胞活性, 与NC组相比, ^aP<0.05, ^bP<0.01, n = 3; C, D: 集落形成实验检测MGC-803细胞和AGS细胞的集落形成, 与NC组相比, ^cP<0.05, n = 3; E、F: Transwell法检测MGC-803细胞和AGS细胞的迁移能力, 与NC组相比, ^eP<0.05, n = 3; G、H: Transwell法检测MGC-803细胞和AGS细胞的侵袭能力, 与NC组相比, ^gP<0.05, n = 3.

图4 THBS2是miR-10a-5p的靶基因. A: Western blot法检测GN和GC组织中THBS2蛋白表达; B: RT-qPCR法检测GN和GC组织中THBS2 mRNA表达, 与癌旁正常组织相比, ^aP<0.05, n = 10; C: Western blot法检测GES, MGC-803和AGS细胞中THBS2蛋白表达; D: RT-qPCR法检测GES, MGC-803和AGS细胞中THBS2 mRNA表达, 与GES细胞相比, ^cP<0.05, n = 3; E: TargetScan软件预测的THBS2 3'UTR与miR-10a-5p结合序列(红色)和点突变序列(下); F: 双荧光素酶基因法THBS2相对荧光酶活性, 与NC组相比, ^eP<0.05, n = 3; G: Western blot法检测敲低miR-10a-5p的MGC-803细胞中THBS2蛋白表达; H: RT-qPCR法检测敲低miR-10a-5p的MGC-803细胞中THBS2 mRNA表达, 与NC组相比, ^gP<0.05, n = 3. RT-qPCR: 实时荧光定量PCR; GC: 癌.

图5 过表达THBS2逆转miR-10a-5p敲低对MGC-803细胞增殖, 集落形成, 迁移与侵袭的抑制作用. miR-10a-5p inhibitor和pcDNA-THBS2共转染入MGC-803后, A: Western blot法检测细胞中THBS2蛋白表达; B: RT-qPCR法检测细胞中THBS2 mRNA表达, 与NC+pcDNA-Con组相比, ^aP<0.05; 与miR-10a-5p inhibitor+pcDNA-Con组相比, ^cP<0.05, n = 3; C: CCK-8法检测细胞活性, 与NC+pcDNA-Con组相比, ^aP<0.05, ^bP<0.01; 与miR-10a-5p inhibitor+pcDNA-Con组相比, ^cP<0.05, ^dP<0.01, n = 3; D、E: 集落形成实验检测细胞的集落形成, 与NC+pcDNA-Con组相比, ^aP<0.05; 与miR-10a-5p inhibitor+pcDNA-Con组相比, ^cP<0.05, n = 3; F-H: Transwell法检测细胞的迁移与侵袭能力; 与NC+pcDNA-Con组相比, ^aP<0.05; 与miR-10a-5p inhibitor+pcDNA-Con组相比, ^cP<0.05, n = 3. RT-qPCR: 实时荧光定量PCR.