miR-484通过靶向SIRT1介导细胞凋亡参与非酒精性脂肪肝性肝病损伤

文章亮点

实验背景

近年来, miR-484在调控肿瘤缺氧微环境(肺癌、乳腺癌、结直肠癌、胃癌、肝癌、胰腺癌等)中发挥重要作用, 但目前对miR-484是否参与NAFLD损伤作用机制国内外均尚无相关研究报道.

实验动机

本研究旨在研究miR-484在高脂暴露下对肝细胞凋亡影响, 并探讨其分子作用机制, 为预防或治疗NAFLD损伤提供新的靶点.

实验目标

探讨miR-484通过SIRT1介导细胞凋亡参与NAFLD损伤机制, 为临床治疗或诊断NAFLD提供科研依据.

实验方法

首先, 我们采用野生组(WT组)、miR-484敲除组(miR-484 KO组)小鼠进行高脂造模, 通过RT-qPCR和Western blot实验验证miR-484对下游分子SIRT1的表达影响. 此外, 用一定浓度的游离脂肪酸建立NAFLD细胞模型, 随机分成miR-484 mimic(M组)、miR-484 mimic NC(MC组)、miR-484 inhibitor(I组)、miR-484 inhibitor NC(IC组)、pcDNA SIRT1组、pcDNA组, 采用油红O染色法分析脂滴积累情况, 流式细胞学分析细胞凋亡, Western blot检测LO2细胞SIRT1蛋白表达, 双荧光素酶报告基因检测实验验证miR-484与SIIRT1的靶向关系.

实验结果

本研究通过建立小鼠和细胞高脂模型发现: miR-484通过下调SIRT1表达, 诱导细胞凋亡加重非酒精性脂肪肝损伤. 降低miR-484表达或者上调SIRT1表达能够通过抑制细胞凋亡减轻非酒精性脂肪肝损伤.

实验结论

肝脏细胞在高脂暴露下通过促进miR-484表达上调, 导致下游分子SIRT1表达下调, 进一步加速细胞凋亡, 加重非酒精性脂肪肝损伤作用.

展望前景

本研究通过体内及体外实验共同验证miR-484在高脂暴露下抑制SIRT1表达, 通过促进细胞凋亡, 后期还需要进一步研究高脂暴露下如何促进miR-484表达上调, 明确miR-484上游调控分子, 以更清晰的展示非酒精性脂肪肝损伤作用机制, 也为治疗非酒精性脂肪肝损伤提供理论依据.