基础研究
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世界华人消化杂志. 2021-04-28; 29(8): 389-397
Published online 2021-04-28. doi: 10.11569/wcjd.v29.i8.389
miR-484通过靶向SIRT1介导细胞凋亡参与非酒精性脂肪肝性肝病损伤
贾银钊, 枚巧娟, 张勇
贾银钊, 张勇, 武汉协和医院肝胆外科 湖北省武汉市 430022
枚巧娟, 华中科技大学同济医学院生殖研究健康所 湖北省武汉市 430030
张勇, 主任医师, 研究方向为非酒精性脂肪肝性肝病及缺血再灌注损伤机制.
基金项目: 国家自然科学基金面上项目, No. 81570566.
作者贡献分布: 张勇与贾银钊对此文所作贡献均等; 此课题由张勇与贾银钊设计; 研究过程由张勇、贾银钊、枚巧娟操作完成; 数据分析由贾银钊、枚巧娟完成; 本论文写作由张勇、贾银钊完成.
通讯作者: 张勇, 教授, 主任医师, 430022, 湖北省武汉市江汉区解放大道1277号, 武汉协和医院肝胆外科. mailzhangyong@126.com
收稿日期: 2021-01-21
修回日期: 2021-02-25
接受日期: 2021-03-15
在线出版日期: 2021-04-28
Abstract
背景

目前非酒精性脂肪肝性病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)已经成为被严重低估的重大健康威胁. 尽管NAFLD发病机理复杂, 但是越来越多的证据表明microRNAs (miRNAs)在调控NAFLD的发生和发展中起着重要的作用. 其中, miR-484是否参与NAFLD发生和发展仍有待阐明.

目的

研究miR-484参与肝脏脂肪变性的损伤作用机制.

方法

通过喂养高脂饲料建立小鼠高脂模型, 采用RT-qPCR和Western blot方法测定肝组织中miR-484和SIRT1的mRNA和蛋白水平, 再次构建miR-484基因敲除NAFLD小鼠模型, 检测小鼠血清ALT、AST、TG、TC变化水平, 通过油红O染色、HE染色和TUNEL染色检测脂肪变性程度和细胞凋亡水平. 此外, 通过游离脂肪酸构建NAFLD细胞模型, 采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-484和SIRT1的直接靶向关系; 通过转染pc-DNA和pc-DNA SIRT1构建SIRT1过表达模型, 通过油红O染色检测脂质积累和流式细胞学检测细胞凋亡水平.

结果

在NAFLD小鼠模型中, miR-484表达明显上调, 而SIRT1表达下降; 敲除miR-484后小鼠脂肪变性程度减轻,血清ALT和AST明显降低. 在NAFLD细胞模型中, miR-484能够通过直接靶向SIRT1, 过表达SIRT1显著降低细胞凋亡率, 减轻肝细胞脂质积累.

结论

miR-484通过靶向SIRT1调控细胞凋亡, 加重肝细胞脂质积累, 表明miR-484可能是NAFLD的治疗靶标.

Keywords: 非酒精性脂肪肝性肝病疾病; miR-484; NAD-依赖性去乙酰化酶Sirtuin-1; 脂肪变性; 细胞凋亡

核心提要: 近年来, miR-484在调控肿瘤缺氧微环境(肺癌、乳腺癌、结直肠癌、胃癌、肝癌、胰腺癌等)中发挥重要作用, 但目前对miR-484是否参与NAFLD损伤作用机制国内外均尚无相关研究报道. 本研究通过建立小鼠和细胞高脂模型发现: miR‐484通过下调SIRT1表达, 诱导细胞凋亡加重非酒精性脂肪肝损伤. 降低miR-484表达或者上调SIRT1表达能够通过抑制细胞凋亡减轻非酒精性脂肪肝损伤, 为预防或治疗NAFLD损伤提供新的靶点.