修回日期: 2019-07-26
接受日期: 2019-08-19
在线出版日期: 2019-08-28
急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)发病率逐年升高,严重影响患者生活质量, 目前关于AP发病机制尚未完全阐明, miRNA作为内源性非编码小RNA分子广泛分布于多种组织或器官中, 其异常表达可参与多种疾病发生及发展过程, 本研究试图寻找miRNA与AP发生及发展的相关性, 揭示其潜在作用机制, 为临床研发治疗药物或制定治疗方案提供依据.
本研究主题为揭示miR-7a-5p与AP发生及发展的相关性及其潜在作用机制, 拟解决的问题是为揭示AP致病机制提供新方向, 为进一步揭示AP致病机制提供理论依据.
本研究主要目标是揭示miR-7a-5p与活化信号转导和转录激活因子的蛋白抑制因子-1(protein inhibitor of activated signal transducer and activator of transcription 1, PIAS1)在AP致病机制的靶向关系, 可为下一步体内动物实验研究奠定基础, 对临床提高AP治疗效果提供参考.
本研究选用雨蛙肽素构建AP模型, 检测胰腺炎细胞中miR-7a-5p与PIAS1表达水平, 检测抑制miR-7a-5p表达及PIAS1过表达对细胞增殖、凋亡的影响, 双荧光素酶报告基因检测miR-7a-5p与PIAS1的靶向作用. 在胰腺炎细胞中首次验证miR-7a-5p与PIAS1的靶向关系.
本研究证实胰腺炎细胞中miR-7a-5p表达升高, PIAS1表达降低, 抑制miR-7a-5p表达或PIAS1过表达可抑制细胞凋亡, 双荧光素酶报告基因证实miR-7a-5p可负向调控靶基因PIAS1的表达活性, 抑制PIAS1表达可逆转抑制miR-7a-5p表达对细胞增殖及凋亡的作用.
本研究首次发现miR-7a-5p与PIAS1的靶向调控关系; 首次提出miR-7a-5p可负向调控PIAS1表达而参与胰腺细胞增殖及凋亡过程; 为miRNA与AP致病机制的细胞学基础提供新理论; 针对miR-7a-5p与AP的相关性可进一步进行体内实验, 还需研究其与相关信号通路的作用关系, 构建整体调控网络; 证实AP中miR-7a-5p可靶向负性调控PIAS1的表达, 为未来研究提供理论依据.
经验教训: 选用适宜浓度的雨蛙肽构建AP模型, 收集细胞及处理细胞时需谨慎小心, 避免失误, 减少失误; 未来方向: 体内实验研究, 寻找miR-7a-5p上游调控基因LncRNA或circRNA; 最佳方法: 细胞实验, 体内实验, 测序分析.