基础研究
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世界华人消化杂志. 2019-08-28; 27(16): 991-998
Published online 2019-08-28. doi: 10.11569/wcjd.v27.i16.991
miR-7a-5p对急性胰腺炎腺泡细胞增殖、凋亡的影响及机制
楼一波, 王晓华, 傅志成
楼一波, 王晓华, 义乌市中心医院急诊科 浙江省义乌市 322000
楼一波, 医师, 主要从事急诊疾病方向的研究.
傅志成, 义乌市中心医院消化科 浙江省义乌市 322000
作者贡献分布: 此课题由楼一波、王晓华及傅志成共同设计; 研究过程由楼一波及傅志成操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由王晓华提供; 数据分析由楼一波、王晓华及傅志成完成; 本论文写作由楼一波及傅志成完成.
通讯作者: 楼一波, 医师, 322000, 浙江省义乌市苏溪镇徐樟塘村30栋3单元401, 义乌市中心医院急诊科. iq84559664ro@163.com
收稿日期: 2019-04-04
修回日期: 2019-07-26
接受日期: 2019-08-19
在线出版日期: 2019-08-28
Abstract
背景

胰腺腺泡细胞增殖及凋亡与急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)发生密切相关, miRNA可通过调控靶基因表达从而参与细胞增殖及凋亡过程, 因而寻找与胰腺腺泡细胞增殖及凋亡相关的miRNA分子标志物对临床诊断及治疗AP具有重要意义.

目的

探讨微小RNA-7a-5p(miR-7a-5p)对AP腺泡细胞增殖、凋亡的影响及机制.

方法

构建雨蛙肽诱导的AP模型并收集胰腺炎腺泡细胞AR42J(雨蛙肽组), 采用qRT-PCR与Western blot分别检测未经雨蛙肽诱导的AR42J细胞(对照组)及雨蛙肽组AR42J细胞中miR-7a-5p相对表达量及活化信号转导和转录激活因子的蛋白抑制因子-1(protein inhibitor of activated signal transducer and activator of transcription 1, PIAS1)表达. 分别将anti-miR-7a-5p、pcDNA-PIAS1转染至雨蛙肽组AR42J细胞, 采用MTT法检测AR42J细胞增殖能力, 流式细胞术检测AR42J细胞凋亡. 荧光素酶报告系统检测miR-7a-5p对PIAS1基因的靶向调控作用, 并采用Western blot检测miR-7a-5p对PIAS1蛋白表达的调控作用. 采用RNA干扰技术沉默PIAS1表达(si-PIAS1组), 分别将si-PIAS1及其阴性对照转染至anti-miR-7a-5p组AR42J细胞, 观察AR42J细胞增殖及凋亡能力.

结果

与对照组相比, 雨蛙肽组AR42J细胞中miR-7a-5p表达水平显著升高(P<0.05), PIAS1蛋白表达显著降低(P<0.05); 抑制miR-7a-5p表达可促进胰腺炎腺泡细胞AR42J增殖并抑制其凋亡; miR-7a-5p可负向调控靶基因PIAS1表达; PIAS1过表达可促进AR42J细胞增殖并抑制其凋亡; 与anti-miR-7a-5p+si-NC组相比, anti-miR-7a-5p+si-PIAS1组AR42J细胞活性显著降低(P<0.05), 细胞凋亡率显著升高(P<0.05).

结论

miR-7a-5p可通过抑制PIAS1表达进而促进AP腺泡细胞凋亡并降低细胞增殖能力.

Keywords: miR-7a-5p; 急性胰腺炎; 胰腺腺泡细胞; 增殖; 凋亡

核心提要: 本研究采用雨蛙肽处理AR42J细胞构建急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)细胞模型,分析miR-7a-5p对胰腺炎细胞增殖及凋亡的影响,初步验证其作用靶基因,为揭示AP发病机制及治疗方法奠定理论基础.