肝癌相关基因表达的荧光定量PCR检测及分子诊断指数的建立

表1 12个基因的引物序列

引物	序列5'→3'片段	大小(bp)	退火温度(℃)
G3PDH	CTCATGACCACAGTCCATGCCATCACTG	140	62.5
	CATGAGGTCCACCACCCTGTTGCTGTA
PRDM2	GGGATGGATGTGCATTGATG	350	60.0
	GCAGAGGTGAAATCTGGCTCA
IGFBP3	GGGCTCTGCGTCAACGCTAGTG	445	62.5
	CCCGCTTCCTGCCTTTGGAAGG
DLC-1	TTTACCACCTGCTGAATTACTCACGCC	300	63.0
	ACGTCTGTGTAGTGCACAGGAAAGCC
WWOX	AGGGCGAGTGAAGCAGTGTCACGC	601	62.5
	CGGTGGTGGCAGCTCCCTGTTG
STMN	TATCCAGGTGAAAGAACTGGAGAAG	381	60.0
	TCTTCAATGTGCTTATCCTTCTCTC
GPC3	TGACCTGAAAGTATTTGGGAATTTCC	427	63.0
	CAATAGTGGTGGTCAGCTTTCCTG
CCNA2	ATGTCACCGTTCCTCCTTGG	401	60.0
	CCAGTCCACGAGGATAGCTCTC
BIRC5	CCATTAACCGCCAGATTTGAA	249	65.0
	TTCCAGCTCCTTGAAGCAGAA
AFP	TCAGTGAGGACAAACTATTGG	395	62.5
	CTCTTCAGCAAAGCAGACTTC
CD133	GACCCATTGGCATTCTCTTTGA	251	63.0
	ACACATACAAAAGAAATACCCCACC
UBD	AGAGATGGCTCCCAATGCTTCCT	250	60.0
	CTTCACCACTTTCAGGGTAAGGTG

表2 8个基因在各组中的表达存在差异

	NL	LC	M	N2	T	P值
n	10	10	38	40	40
PRDM2	1.08±0.43	0.50±0.20	0.91±1.19	0.82±0.88	0.45±0.69	0.000
IGFBP3	1.11±0.52	0.67±0.47	0.59±0.53	0.61±0.49	0.17±0.20	0.000
DLC-1	1.04±0.30	0.58±0.60	0.57±0.63	0.66±0.74	0.29±0.48	0.000
STMN	1.02±0.22	1.17±1.08	2.37±2.27	2.13±1.76	17.56±28.28	0.000
GPC3	1.05±0.33	4.41±3.99	8.18±16.12	6.55±10.58	677.57±999.30	0.000
CCNA2	1.04±0.31	2.09±1.50	4.77±5.77	3.65±4.32	53.17±103.64	0.000
BIRC5	1.04±0.31	1.82±1.39	2.51±2.31	3.48±6.50	16.53±16.39	0.000
AFP	1.10±0.50	0.86±0.43	10.76±26.71	54.44±249.26	4 445.70±11 642.87	0.000

NL: 正常肝; LC: 肝硬化; M: 手术切缘; N2: 癌旁2 cm; T: 癌. P值: NL, LC, M, N2, T多组独立样本间秩和检验.

表3 40例肝癌标本的分子诊断指数

样本	M	N2	T	样本	M	N2	T
215	3	2	5	320	3	5	7
217	1	2	4	339	4	5	7
220	3	2	6	348	5	6	7
221	4	3	6	349	4	4	5
222	3	3	7	358	5	5	8
233	3	4	6	359	5	4	6
245	5	5	7	363	2	0	5
246	6	5	7	365	3	2	6
262	3	1	4	369	3	3	4
265	5	3	8	374	1	5	4
267	5	3	8	376	4	2	7
269	3	1	8	381	1	2	6
270	2	1	6	386	1	1	5
273	3	1	5	398	0	1	6
291	1	4	8	399	0	3	7
296	4	3	7	402		3	5
301	1	2	8	407		2	6
302	5	3	7	409	4	3	6
306	1	4	7	410	4	2	5
310	2	2	7	411	3	2	7

M: 手术切缘; N2: 癌旁2 cm; T: 癌. 从编号215到411共40例肝癌标本, 他们在手术切缘、癌旁2 cm、癌组织中的分子诊断指数是根据8个基因相对表达量>或<3倍正常组织表达量的基因个数确定的, 即标本中每有一个基因表达量与正常组织相差3倍则分子诊断指数增加1, 因此分子诊断指数0-8, 数字表示基因变异表达的个数.