5-Aza-dC及TSA对人胃癌细胞株SGC-7901 Runx3基因甲基化及表达水平的影响

表1 QMSP所需的引物和探针序列

基因	QMSP所需引物及探针序列 (5'-3')
Runx3[9]	Forward Primer	CGTTCGATGGTGGACGTGT
	Reverse Primer	GACGAACAACGTCTTATTACAACGC
	Probe	FAM-CGCACGAACTCGCCTACGTAATCCG-TAMRA
β-Actin[10]	Forward Primer	TGGTGATGGAGGAGGTTTAGTAAGT
	Reverse Primer	AACCAATAAAACCTACTCCTCCCTTAA
	Probe	FAM-ACCACCACCCAACACACAATAACAAACACA-TAMRA

表2 Runx3及β-Actin基因RT-PCR所需引物序列及反应条件

基因	Forward Primer(5'-3')	Reverse Primer(5'-3')	产物大小(bp)	退火温度(℃)	循环数
Runx3[11]	CAGAAGCTGGAGGACCAGAC	TCGGAGAATGGGTTCAGTTC	179	52	35
β-Actin[12]	TGGCACCCAGCACAATGAA	CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA	186	52	35

表3 各组细胞甲基化水平的相对定量结果

分组	Ct(Runx3)	Ct(β-Actin)	△Ct	△△Ct	2-△△Ct
对照组	31.28±0.18	30.40±0.20	0.88	0	1
5-Aza-dC组	31.35±0.23	29.96±0.14	1.39	0.51	0.70
TSA组	31.68±0.12	30.13±0.25	1.55	0.67	0.63
5-Aza-dC + TSA组	31.63±0.27	29.31±0.19	2.32	1.44	0.37