基础研究 Open Access
Copyright ©The Author(s) 2022. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2022-11-28; 30(22): 997-1003
在线出版日期: 2022-11-28. doi: 10.11569/wcjd.v30.i22.997
lncRNA H19靶向miR-30a-5p对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎细胞凋亡、炎症因子分泌和自噬的影响
王春晖, 潘卓, 唐忠明
王春晖, 潘卓, 湖州市第一人民医院外科 浙江省湖州市 313000
王春晖, 主治医师, 研究方向为急性胰腺炎.
唐忠明, 湖州市第一人民医院消化科 浙江省湖州市 313000
ORCID number: 潘卓 (0000-0002-2439-6180).
作者贡献分布: 王春晖、潘卓及唐忠明对此文所作贡献均等, 包括课题设计, 实验操作、数据分析及论文写作; 研究所用新试剂及分析工具由潘卓提供.
通讯作者: 潘卓, 本科, 313000, 浙江省湖州市广场后路158号, 湖州市第一人民医院外科. m18267851073@163.com
收稿日期: 2022-08-19
修回日期: 2022-09-27
接受日期: 2022-10-20
在线出版日期: 2022-11-28

背景

本研究旨在探究影响急性胰腺炎进程的潜在分子机制. 通过功能缺失实验分析H19敲低对细胞功能的影响. 并通过生物信息学预测以及实验验证确定H19与miR-30a-5p的互作关系. 我们推测H19可能通过靶向miR-30a-5p来促进急性胰腺炎进程.

目的

研究lncRNA H19靶向miR-30a-5p对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎细胞凋亡、炎症因子分泌和自噬的影响.

方法

培养人胰腺AR42J细胞, 雨蛙肽诱导建立胰腺损伤细胞模型. 将实验分为雨蛙肽+si-NC组、雨蛙肽+si-H19组、雨蛙肽+miR-NC组、雨蛙肽+miR-30a-5p组、雨蛙肽+si-H19+anti-miR-NC组、雨蛙肽+si-H19+anti-miR-30a-5p组. 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中H19和miR-30a-5p表达水平; 流式细胞术检测细胞凋亡; 酶联免疫吸附实验检测细胞中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)和白介素-6(interleukin-6, IL-6)水平; 蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞自噬相关的微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1 light chain 3, LC3)-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达. 双荧光素酶实验检测细胞中H19和miR-30a-5p靶向结合关系.

结果

与正常胰腺细胞比较, 雨蛙肽诱导损伤的胰腺炎细胞中H19表达水平显著升高, miR-30a-5p表达水平显著降低(P<0.05). 与雨蛙肽+si-NC组比较, 雨蛙肽+si-H19组H19表达水平显著降低; 细胞存活率显著升高; TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著降低; LC3-Ⅰ蛋白表达显著降低、LC3-Ⅱ蛋白表达显著升高(P<0.05). 与雨蛙肽+miR-NC组比较, 雨蛙肽+miR-30a-5p组miR-30a-5p表达水平显著升高; 细胞存活率显著升高; TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著降低; LC3-Ⅰ蛋白表达显著降低、LC3-Ⅱ蛋白表达显著升高(P<0.05). 与雨蛙肽+si-H19+anti-miR-NC比较, 雨蛙肽+si-H19+anti-miR-30a-5p组miR-30a-5p表达显著降低; 细胞存活率显著降低; TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高; LC3-Ⅰ蛋白表达显著升高、LC3-Ⅱ蛋白表达显著降低(P<0.05).

结论

下调H19通过靶向miR-30a-5p来抑制雨蛙肽诱导的急性胰腺炎细胞凋亡、炎症因子分泌和自噬.

关键词: lncRNA H19; miR-30a-5p; 急性胰腺炎; 凋亡; 炎症因子; 自噬

核心提要: H19在雨蛙肽诱导的胰腺炎细胞损伤模型中表达水平显著升高, 且其敲低可以抑制雨蛙肽诱导的细胞凋亡、炎症因子分泌和自噬. 此外, H19可以靶向miR-30a-5p, 且anti-miR-30a-5p可以逆转H19敲低对细胞损伤的抑制作用.
引文著录: 王春晖, 潘卓, 唐忠明. lncRNA H19靶向miR-30a-5p对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎细胞凋亡、炎症因子分泌和自噬的影响. 世界华人消化杂志 2022; 30(22): 997-1003
Effect of lncRNA H19 targeting miR-30a-5p on cell apoptosis, secretion of inflammatory factors, and autophagy in caerulein-induced acute pancreatitis
Chun-Hui Wang, Zhuo Pan, Zhong-Ming Tang
Chun-Hui Wang, Zhuo Pan, The First People's Hospital Surgery of Huzhou City, Huzhou 313000, Zhejiang Province, China
Zhong-Ming Tang, Gastroenterology Department, The First People's Hospital of Huzhou City, Huzhou 313000, Zhejiang Province, China
Corresponding author: Zhuo Pan, Bachelor, Department of Surgery, The First People's Hospital of Huzhou City, No. 158 Guangchang Hou Road, Huzhou 313000, Zhejiang Province, China. m18267851073@163.com
Received: August 19, 2022
Revised: September 27, 2022
Accepted: October 20, 2022
Published online: November 28, 2022

BACKGROUND

We hypothesized that H19 might promote the progression of acute pancreatitis by targeting miR-30a-5p.

AIM

To investigate the effect of lncRNA H19 targeting miR-30a-5p on cell apoptosis, secretion of inflammatory factors, and autophagy in a caerulein-induced acute pancreatitis cell model.

METHODS

Human pancreatic AR42J cells were cultured and treated with caerulein to establish a pancreatic injury cell model. The cells were divided into cerulean + si-NC group, cerulean + si-H19 group, cerulean + miR-NC group, cerulean + miR-30a-5p group, cerulean + si-H19 + anti-miR-NC group, and cerulean + si-H19 + anti-miR-30a-5p group. Real-time fluorescence quantitative PCR was used to detect the expression levels of H19 and miR-30a-5p in cells; flow cytometry was used to detect apoptosis; enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect TNF-α, IL-1β, and IL-6 levels; Western blot was used to detect autophagy-related microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅰ(LC3-Ⅰ) and microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ (LC3-Ⅱ) protein expression; dual luciferase assay was used to detect the target relationship between H19 and miR-30a-5p in cells.

RESULTS

Compared with normal pancreatic cells, H19 expression was increased and miR-30a-5p expression was decreased in pancreatitis cells induced by caerulein (P < 0.05). Compared with the cerulean + si-NC group, H19 expression was reduced, the cell survival rate was increased, the levels of TNF-α, IL-1β, and IL-6 were reduced, and LC3-Ⅰ protein expression was reduced and LC3-Ⅱ protein expression was increased in the cerulein+si-H19 group (P < 0.05). Compared with the caerulein + miR-NC group, miR-30a-5p expression was increased, the cell survival rate was increased, the levels of TNF-α, IL-1β, and IL-6 were decreased, and LC3-Ⅰ protein expression was reduced and LC3-Ⅱ protein expression was increased in the caerulein + miR-30a-5p group (P < 0.05). Compared with the cerulean + si-H19 + anti-miR-NC group, the expression of miR-30a-5p was significantly reduced, the cell survival rate was reduced, the levels of TNF-α, IL-1β, and IL-6 were increased, and LC3-Ⅰ protein expression was increased and LC3-Ⅱ protein expression was decreased in the cerulean + si-H19 + anti-miR-30a-5p group (P < 0.05).

CONCLUSION

Down-regulation of H19 inhibits the apoptosis, secretion of inflammatory factors, and autophagy in the acute pancreatitis cell model induced by caerulein by targeting miR-30a-5p.

Key Words: lncRNA H19; miR-30a-5p; Acute pancreatitis; Apoptosis; Inflammatory factors; Autophagy
0 引言

急性胰腺炎是胰腺的一种炎症性疾病, 轻症以胰腺水肿和出血为主, 重症可出现组织坏死, 预后较差[1,2]. 长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)是一类不编码蛋白的RNA分子, 广泛参与细胞分化、增殖、凋亡和炎症等调控过程[3,4]. 如lncR-RGD1566401的上调表达能够促进大鼠急性胰腺炎AR42J细胞凋亡[5]. LncRNA浆细胞瘤多样异位基因1(plasmacytoma variant translocation 1, PVT1)可通过调控微小RNA(miR)-30a-5p表达, 促进胰腺腺泡细胞自噬, 加重急性胰腺炎[6]. LncRNA核内富集转录物1(nuclear enriched abundant transcript 1, NEAT1)下调可通过海绵miR-365a-3p缓解雨蛙肽诱导的腺泡细胞炎症损伤[7].

已有研究报道lncRNA H19在急性胰腺炎中异常表达, 与疾病严重程度有关[8]. 但lncRNA H19在胰腺腺泡细胞损伤中的作用及机制还有待进一步探究. 本研究利用雨蛙肽诱导胰腺AR42J细胞构建体外急性胰腺炎细胞模型, 以期揭示lncRNA H19在细胞损伤中的调控作用机制.

1 材料和方法
1.1 材料

人胰腺AR42J细胞购自中科院上海细胞库; 改良Eagle培养基(dulbecco's modified eagle medium, DMEM)培养基购自美国Sigma公司; 胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)购自美国Promega公司; 雨蛙肽购自美国BD公司; 脂质体Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司; TRIzol试剂购自大连宝生物科技有限公司; 膜联蛋白V异硫氰酸荧光素(Annexin V fluorescein isothiocyanate, Annexin V-FITC)/碘化丙啶(propidium iodide, PI)凋亡试剂盒购自美国Cell Signaling公司; 肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)和白介素-6(interleukin-6, IL-6)检测试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司; 二辛可宁酸(bicinchoninic acid, BCA)试剂盒购自北京天根生化科技公司.

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及处理: 胰腺AR42J细胞用含10% FBS的DMEM培养基培养, 置于37 ℃、5% CO2条件中, 待细胞融合至60%-90%时, 更换含有浓度100 nM雨蛙肽的培养基继续培养24 h, 建立胰腺损伤细胞模型.

细胞转染和分组: 使用Lipofectamine 2000转染试剂, 根据试剂说明书, 分别将终浓度为30 nM-50 nM的si-NC、si-H19、miR-NC、miR-30a-5p、si-H19与anti-miR-NC、si-H19与anti-miR-30a-5p转染AR42J细胞. 转染48 h后, 更换常规培养基培养24 h, 然后再更换含100 nM雨蛙肽的培养基培养24 h, 根据转染基因不同, 分别将细胞记为雨蛙肽+si-NC组、雨蛙肽+si-H19组、雨蛙肽+miR-NC组、雨蛙肽+miR-30a-5p组、雨蛙肽+si-H19+anti-miR-NC组、雨蛙肽+si-H19+anti-miR-30a-5p组.

1.2.2 RT-qPCR检测H19和miR-30a-5p表达水平: 采用TRIzol试剂提取各组细胞总RNA, 反转录试剂盒将RNA反转录为cDNA. 使用SYBR Green qPCR Master Mix试剂盒进行RT-PCR反应. 循环条件为95 ℃ 5 min, 95 ℃ 30 s, 60 ℃ 30 s, 72 ℃ 30 s, 共40个循环, 60 ℃延长5 min. 2-ΔΔCt方法计算H19和miR-30a-5p相对表达水平.

1.2.3 流式细胞术检测细胞凋亡: 各组细胞培养48 h后用预冷的PBS漂洗2次, 与500 μL的结合缓冲液混匀. 先加入10 μL的Annexin V-FITC, 再加入5 μL的PI, 混匀后避光孵育10 min. 用流式细胞仪检测细胞凋亡率.

1.2.4 ELISA试剂盒检测TNF-α、IL-1β和IL-6水平: 采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)试剂检测TNF-α、IL-1β和IL-6水平, 按照试剂盒附带的说明书进行实验步骤.

1.2.5 双荧光素酶报告实验检测H19和miR-30a-5p的靶向关系: 将含有miR-30a-5p结合位点的H19野生型(wild-type, WT)序列或突变型(mutant-type, MUT)序列克隆到荧光素酶报告质粒, 构建成荧光素酶报告基因载体WT-H19和MUT-H19. 将miR-30a-5p、miR-NC分别与WT-H19或者MUT-H19共转染至雨蛙肽诱导AR42J细胞, 测定各组细胞的荧光素酶活性. 并将si-NC、si-H19、pcDNA-NC、pcDNA-H19分别转染至雨蛙肽诱导AR42J细胞中, 参照RT-qPCR步骤检测细胞miR-30a-5p表达水平.

统计学处理 采用SPSS 20.0软件进行统计学分析, 计量资料用平均数±标准差(mean±SD)表示, 两组比较行t检验, 多组间比较采用单因素方差分析, 组间两两比较采用LSD-t检验. 统计学显著性用aP<0.05表示, 同一表中另一套P值, 则用cP<0.05.

2 结果
2.1 H19和miR-30a-5p在雨蛙肽诱导的AR42J细胞中的表达

与正常胰腺细胞比较, 雨蛙肽诱导损伤的胰腺炎细胞中H19表达水平显著升高, miR-30a-5p表达水平显著降低(P<0.05). 见表1.

表1 H19和miR-30a-5p在雨蛙肽诱导的AR42J细胞中的表达(mean±SD, n = 9).
组别H19miR-30a-5p
正常胰腺细胞1.00±0.101.00±1.10
雨蛙肽诱导损伤的胰腺炎细胞2.76±0.33a0.32±0.02a
t15.78318.974
P0.0000.000
aP<0.05, 与正常胰腺细胞比较.
2.2 低表达H19对雨蛙肽诱导的AR42J细胞凋亡、炎症因子和自噬的影响

与雨蛙肽+si-NC组比较, 雨蛙肽+si-H19组H19表达水平显著降低; 细胞存活率显著升高; TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著降低; 微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1 light chain 3, LC3)-I蛋白表达显著降低、LC3-II蛋白表达显著升高(P<0.05). 见表2和图1.

图1
图1 敲低H19对雨蛙肽诱导的AR42J细胞炎症和自噬的影响. A: 酶联免疫吸附实验检测炎症因子的分泌; B: 蛋白质印迹检测蛋白的表达. 雨蛙肽+si-NC组 vs 雨蛙肽+si-H19组, aP<0.05. TNF-α: 肿瘤坏死因子-α; IL-1β: 白介素-1β; IL-6: 白介素-6; LC3-Ⅰ: 微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ; LC3-Ⅱ: 微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ.
表2 敲低H19对雨蛙肽诱导的AR42J细胞存活的影响(mean±SD, n = 9).
组别H19细胞存活率(%)
雨蛙肽+si-NC1.00±0.0942.89±6.11
雨蛙肽+si-H190.33±0.03a98.99±10.30a
t17.55256.854
P0.0000.000
aP<0.05, 与雨蛙肽+si-NC比较.
2.3 高表达miR-30a-5p对雨蛙肽诱导的AR42J细胞存活、炎症因子和自噬的影响

与雨蛙肽+miR-NC组比较, 雨蛙肽+miR-30a-5p组miR-30a-5p表达水平显著升高; 细胞存活率显著升高; TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著降低; LC3-I蛋白表达显著降低、LC3-Ⅱ蛋白表达显著升高(P<0.05). 见表3和图2.

图2
图2 高表达miR-30a-5p对雨蛙肽诱导的AR42J细胞炎症和自噬的影响. A: 酶联免疫吸附实验检测炎症因子的分泌; B: 蛋白质印迹检测蛋白的表达. 雨蛙肽+miR-NC组 vs 雨蛙肽+miR-30a-5p组, aP<0.05. TNF-α: 肿瘤坏死因子-α; IL-1β: 白介素-1β; IL-6: 白介素-6; LC3-Ⅰ: 微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ; LC3-Ⅱ: 微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ.
表3 高表达miR-30a-5p对雨蛙肽诱导的AR42J细胞存活影响(mean±SD, n = 9).
组别miR-30a-5p细胞存活率(%)
雨蛙肽+miR-NC1.01±0.0945.83±5.11
雨蛙肽+miR-30a-5p3.09±0.48a99.20±9.63a
t14.44059.983
P0.0000.000
aP<0.05, 与雨蛙肽+miR-NC比较.
2.4 H19靶向miR-30a-5p表达

LncBase Predicted v.2预测H19和miR-30a-5p之间存在结合位点, 见图3. 双荧光素酶报告显示, 与转染miR-NC比较, 转染miR-30a-5p可降低WT-H19的相对荧光素酶活性(P<0.05), 而对MUT-H19的相对荧光素酶活性无显著影响(P>0.05), 见表4.

图3
图3 H19和miR-30a-5p靶向结合图. LncBase Predicted v.2预测H19和miR-30a-5p之间存在结合位点. WT-H19: H19野生型; MUT-H19: H19突变型.
表4 双荧光素酶活性检测(mean±SD, n = 9).
组别荧光素酶活性
WT-H19MUT-H19
雨蛙肽+miR-NC1.02±0.091.01±0.09
雨蛙肽+miR-30a-5p0.37±0.04a1.00±0.10
t15.8840.553
P0.0000.749
aP<0.05, 与雨蛙肽+miR-NC比较. WT-H19: H19野生型; MUT-H19: H19突变型.

RT-qPCR检测显示, 与雨蛙肽+si-NC组比较, 雨蛙肽+si-H19组细胞miR-30a-5p表达水平显著升高(P<0.05); 与雨蛙肽+pcDNA-NC组比较, 雨蛙肽+pcDNA-H19组细胞miR-30a-5p表达水平显著降低(P<0.05), 见表5.

表5 qRT-PCR检测miR-30a-5p表达(mean±SD, n = 9).
组别miR-30a-5p
雨蛙肽+si-NC1.01±0.10
雨蛙肽+si-H193.57±0.55a
雨蛙肽+pcDNA-NC1.03±0.10
雨蛙肽+pcDNA-H190.40±0.04c
F156.873
P0.000
aP<0.05, 与雨蛙肽+si-NC比较;
cP<0.05, 与雨蛙肽+pcDNA-NC比较.
2.5 低表达miR-30a-5p可以逆转低表达H19对雨蛙肽诱导的AR42J细胞凋亡、炎症因子和自噬的影响

与雨蛙肽+si-H19+anti-miR-NC比较, 雨蛙肽+si-H19+anti-miR-30a-5p组miR-30a-5p表达显著降低; 细胞存活率显著降低; TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高; LC3-Ⅰ蛋白表达显著升高、LC3-Ⅱ蛋白表达显著降低(P<0.05). 见表6和图4.

图4
图4 低表达miR-30a-5p可以逆转低表达H19对雨蛙肽诱导的AR42J细胞炎症和自噬的影响. A: 酶联免疫吸附实验检测炎症因子的分泌; B: 蛋白质印迹检测蛋白的表达. 雨蛙肽+si-H19+anti-miR-NC组 vs 雨蛙肽+si-H19+anti-miR-30a-5p组, aP<0.05. TNF-α: 肿瘤坏死因子-α; IL-1β: 白介素-1β; IL-6: 白介素-6; LC3-Ⅰ: 微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ; LC3-Ⅱ: 微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ.
表6 低表达miR-30a-5p可以逆转低表达H19对雨蛙肽诱导的AR42J细胞存活的影响(mean±SD, n = 9).
组别miR-30a-5p细胞存活率(%)
雨蛙肽+si-H19+anti-miR-NC1.00±0.0999.20±8.32
雨蛙肽+si-H19+anti-miR-30a-5p0.32±0.03a48.93±5.30a
t16.94679.083
P0.0000.000
aP<0.05, 与雨蛙肽+si-H19+anti-miR-NC比较.
3 讨论

急性胰腺炎是一种比较常见的消化系统疾病, 成年人发病概率比较高, 根据病理分型可分为间质水肿型和坏死型两种. 引起该病的病因非常多, 在我国最常见的是胆石症、酒精和高脂血症[9,10].

LncRNA H19在急性胰腺炎患者的血清中表达升高, 且对于急性胰腺炎诊断和严重程度的预判具有一定临床价值[11]. 重症急性胰腺炎大鼠胰腺中miR-30a-5p表达显著降低[12]. 本实验研究发现, 与正常胰腺细胞比较, 雨蛙肽诱导急性胰腺炎细胞中H19表达水平显著升高, miR-30a-5p表达水平显著降低. 此外, 有研究表明沉默lncRNA H19可减少雨蛙素诱导的胰腺腺泡细胞凋亡, 其可能成为治疗急性胰腺炎的潜在有效靶点[13]. 本实验研究表明, 与雨蛙肽+si-NC组比较, 雨蛙肽+si-H19组H19表达水平显著降低; 细胞存活率显著升高; TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著降低; LC3-I蛋白表达显著降低、LC3-Ⅱ蛋白表达显著升高.

miRNA是一类长度约19-22个核苷酸的非编码RNA, 是重要的转录后调控因子[14,15]. 已经有研究报道, miR-155抑制剂能够降低重症急性胰腺炎大鼠炎症因子, 减轻重症急性胰腺炎急性肺损伤[16]. 急性胰腺炎患者外周血miR-16和miR-192表达及其与病情严重程度密切相关[17]. miR-7a-5p可促进急性胰腺炎腺泡细胞凋亡并降低细胞增殖能力[18]. 本实验研究结果, 与雨蛙肽+miR-NC组比较, 雨蛙肽+miR-30a-5p组miR-30a-5p表达水平显著升高; 细胞存活率显著升高; TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著降低; LC3-I蛋白表达显著降低、LC3-Ⅱ蛋白表达显著升高.

本实验研究显示, 与雨蛙肽+si-H19+anti-miR-NC比较, 雨蛙肽+si-H19+anti-miR-30a-5p组miR-30a-5p表达显著降低; 细胞存活率显著降低; TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高; LC3-Ⅰ蛋白表达显著升高、LC3-Ⅱ蛋白表达显著降低. 有类似的研究报道与本实验一致. LncRNA β-1,3半乳糖基转移酶-反义5(β-1,3-galactosyltransferase 5-AS1, B3GALT5-AS1)靶向miR-361-3p调节大鼠胰腺腺泡细胞增殖及凋亡[19]. miR-141-3p靶向调控CUE结构域蛋白2(CUE domain-containing protein 2, CUEDC2)基因影响雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤[20]. miR-7靶向特异性蛋白3(specific protein 3, Sp3)影响急性胰腺炎腺泡细胞增殖和凋亡[21].

4 结论

综上所述, 下调H19靶向上调miR-30a-5p抑制雨蛙肽诱导的急性胰腺炎细胞凋亡、炎症因子分泌和自噬.

文章亮点
实验背景

急性胰腺炎是一种死亡率较高的严重疾病, 严重威胁着人类健康. 探究影响急性胰腺炎进程的分子机制, 有望为其治疗提供理论依据.

实验动机

许多长链非编码RNA被证实参与了急性胰腺炎进程, 但是H19在急性胰腺炎进程中的作用和潜在分子机制值得进一步揭示. 对H19作用的探究可能为其成为急性胰腺炎的治疗靶点提供证据.

实验目标

本研究希望通过揭示调控急性胰腺炎进程的潜在分子机制, 为急性胰腺炎的治疗提供有效分子靶点.

实验方法

雨蛙肽诱导建立胰腺损伤细胞模型. 通过细胞计数实验和流式细胞术检测细胞活力和凋亡; 酶联免疫吸附实验评估炎症因子的分泌; 蛋白质印迹法检测细胞自噬相关蛋白表达. 双荧光素酶实验检测细胞中H19和miR-30a-5p靶向结合关系.

实验结果

H19敲低可以改善雨蛙肽诱导的急性胰腺炎细胞凋亡、炎症和自噬. H19可以靶向miR-30a-5p, 且其敲低对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎细胞损伤的影响可以被miR-30a-5p抑制剂所逆转.

实验结论

H19通过靶向miR-30a-5p促进雨蛙肽诱导的急性胰腺炎细胞损伤, 表明其可能对急性胰腺炎进程有促进作用.

展望前景

H19可能是急性胰腺炎治疗的潜在分子靶点. 未来可以在临床水平以及动物水平进一步证实H19/miR-30a-5p调控急性胰腺炎进程的结论.

学科分类: 胃肠病学和肝病学

手稿来源地: 浙江省

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科学编辑:张砚梁 制作编辑:张砚梁

1.  Paragomi P, Phillips AE, Machicado JD, Lahooti A, Kamal A, Afghani E, Pothoulakis I, Reynolds SL, Mays M, Conwell DL, Lara LF, Singh VK, Papachristou GI. Post-Acute Pancreatitis Pancreatic Exocrine Insufficiency: Rationale and Methodology of a Prospective, Observational, Multicenter Cohort Study. Pancreas. 2021;50:147-152.  [PubMed]  [DOI]
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