lncRNA H19靶向miR-30a-5p对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎细胞凋亡、炎症因子分泌和自噬的影响

Abstract

背景

本研究旨在探究影响急性胰腺炎进程的潜在分子机制. 通过功能缺失实验分析H19敲低对细胞功能的影响. 并通过生物信息学预测以及实验验证确定H19与miR-30a-5p的互作关系. 我们推测H19可能通过靶向miR-30a-5p来促进急性胰腺炎进程.

目的

研究lncRNA H19靶向miR-30a-5p对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎细胞凋亡、炎症因子分泌和自噬的影响.

方法

培养人胰腺AR42J细胞, 雨蛙肽诱导建立胰腺损伤细胞模型. 将实验分为雨蛙肽+si-NC组、雨蛙肽+si-H19组、雨蛙肽+miR-NC组、雨蛙肽+miR-30a-5p组、雨蛙肽+si-H19+anti-miR-NC组、雨蛙肽+si-H19+anti-miR-30a-5p组. 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中H19和miR-30a-5p表达水平; 流式细胞术检测细胞凋亡; 酶联免疫吸附实验检测细胞中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)和白介素-6(interleukin-6, IL-6)水平; 蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞自噬相关的微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1 light chain 3, LC3)-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达. 双荧光素酶实验检测细胞中H19和miR-30a-5p靶向结合关系.

结果

与正常胰腺细胞比较, 雨蛙肽诱导损伤的胰腺炎细胞中H19表达水平显著升高, miR-30a-5p表达水平显著降低(P<0.05). 与雨蛙肽+si-NC组比较, 雨蛙肽+si-H19组H19表达水平显著降低; 细胞存活率显著升高; TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著降低; LC3-Ⅰ蛋白表达显著降低、LC3-Ⅱ蛋白表达显著升高(P<0.05). 与雨蛙肽+miR-NC组比较, 雨蛙肽+miR-30a-5p组miR-30a-5p表达水平显著升高; 细胞存活率显著升高; TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著降低; LC3-Ⅰ蛋白表达显著降低、LC3-Ⅱ蛋白表达显著升高(P<0.05). 与雨蛙肽+si-H19+anti-miR-NC比较, 雨蛙肽+si-H19+anti-miR-30a-5p组miR-30a-5p表达显著降低; 细胞存活率显著降低; TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高; LC3-Ⅰ蛋白表达显著升高、LC3-Ⅱ蛋白表达显著降低(P<0.05).

结论

下调H19通过靶向miR-30a-5p来抑制雨蛙肽诱导的急性胰腺炎细胞凋亡、炎症因子分泌和自噬.

Keywords: lncRNA H19; miR-30a-5p; 急性胰腺炎; 凋亡; 炎症因子; 自噬

核心提要: H19在雨蛙肽诱导的胰腺炎细胞损伤模型中表达水平显著升高, 且其敲低可以抑制雨蛙肽诱导的细胞凋亡、炎症因子分泌和自噬. 此外, H19可以靶向miR-30a-5p, 且anti-miR-30a-5p可以逆转H19敲低对细胞损伤的抑制作用.