修回日期: 2017-12-04
接受日期: 2017-12-12
在线出版日期: 2018-01-18
探讨miRNA-223-3p和上皮细胞转化序列2基因(epithelial cell transforming sequence 2 oncogene, ECT2)在胃癌(gastric cancer, GC)细胞周期和凋亡中的作用和机制, 并探讨其与GC临床病理因素的相关性及临床意义.
首先采用实时荧光聚合酶链反应法(real-time polymerase chain reaction, RT-PCR)和蛋白质印迹法检测正常胃黏膜(GSE-1)和GC细胞(SGC-7901, BGC-823)中ECT2和miR-223-3p的表达水平; 其次, 采用免疫组织化学RT-PCR法检测80例GC患者的癌组织及相应的癌旁组织(距癌组织边缘>5 cm)中ECT2和miR-223-3p的表达情况; miR-223-3p抑制物和模拟物转染SGC-7901细胞, RT-PCR和Western blot检测转染后miR-223-3p和ECT2的表达. 最后用流式细胞仪检测转染后细胞周期和凋亡的变化.
与正常胃黏膜细胞相比, GC细胞中ECT2和miR-223-3p的表达水平均明显升高(P<0.05); 免疫组织化学和RT-PCR结果显示, GC组织中ECT2阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05); 两者表达均与GC的分化程度、Lauren分型相关(P<0.05), 与TNM分期密切相关(P<0.01), 与患者的性别、年龄、肿瘤直径、Bormann分型无明显相关(P>0.05); 两者之间表达呈显著正相关(P<0.05); 将miR-223-3p类似物转染SGC-7901细胞后ECT2表达上调, 转染抑制剂后ECT2表达下调. miR-223-3p抑制物促使肿瘤细胞的G1期阻滞和促进凋亡作用.
miR-223-3p是一种与GC细胞周期和凋亡密切相关的miRNA分子, 他可以通过影响ECT2的表达来调节GC细胞的细胞周期和凋亡; 两者可以作为反映GC生物学行为的有效指标.
核心提要: 胃癌(gastric cancer, GC)死亡率高, 研究表明miRNA在其中起重要调控作用, 但具体机制仍不明确. ECT2是与细胞增殖和凋亡相关的基因, 在多种恶性肿瘤中高表达. 本文分析ECT2同miR-223-3p在GC恶性增殖中的相互作用, 为进一步明晰GC发展机制提供思路.
引文著录: 李伦, 兴成娟, 丛玲, 万义增. miR-223-3p靶向上皮细胞转化序列2基因调控胃癌细胞周期和凋亡的相关性研究. 世界华人消化杂志 2018; 26(2): 71-79
Revised: December 4, 2017
Accepted: December 12, 2017
Published online: January 18, 2018
To explore the role of miRNA-223-3p and epithelial cell transforming sequence 2 oncogene (ECT2) in cell cycle and apoptosis of gastric cancer (GC) cells and to analyze their correlation with clinicopathological characteristics.
The expression of ECT2 and miR-223-3p in normal gastric mucosa cells (GSE-1) and GC cells (SGC-7901 and BGC-823) was detected by real-time fluorescent quantitative PCR and Western blot. Immunohistochemistry and RT-PCR were used to examine the expression of ECT2 and miR-223-3p in GC tissues and paired adjacent normal tissues, respectively. The correlation between ECT2 and miR-223-3p expression and clinicopathological characteristics was then analyzed. After miRNA-223-3p inhibitor and mimic were used to transfect SGC-7901 cells with LipofectamineTM2000, the expression of miRNA-223-3p and ECT2 was assessed by RT-PCR and Western blot in SGC-7901 cells. After another 24 h culture, the apoptosis rate and cell cycle progression were examined by flow cytometry.
The expression levels of ECT2 and miR-223-3p in GC cells were significantly increased as compared with those in normal gastric mucosa cells (P < 0.05 for both). In comparison with tumor adjacent normal tissues, the expression of ECT2 and miR-223-3p in GC tissues was significantly higher (P < 0.05). The expression of ECT2 and miR-223-3p was related to histologic differentiation (P < 0.05), Lauren type (P < 0.05), and TNM stage (P < 0.01), but not with gender, age, Bormann type, or tumor size (P > 0.05). Transfection with miR-223-3p mimic up-regulated ECT2 expression, whereas transfection of miR-223-3p inhibitor downregulated the expression of ECT2. Compared with negative control cells, the apoptosis rate of SGC-7901 cells transfected with miR-223-3p inhibitor significantly increased (P < 0.05), and the percentage of G1 phase cells also significantly increased in miR-223-3p inhibitor transfected cells (P < 0.05).
MiR-223-3p is closely related with cell cycle and apoptosis of gastric cancer cells, and it can regulate the occurrence and development of GC by influencing the expression of ECT2. ECT2 and miR-223-3p may serve as good factors to indicate the biologic behavior of GC.
- Citation: Li L, Xing CJ, Cong L, Wan YZ. MiR-223-3p targets ECT2 to regulate cell cycle and apoptosis in gastric cancer cells. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2018; 26(2): 71-79
- URL: https://www.wjgnet.com/1009-3079/full/v26/i2/71.htm
- DOI: https://dx.doi.org/10.11569/wcjd.v26.i2.71
胃癌(gastric cancer, GC)是常见的消化系恶性肿瘤, 发病率在我国位居第4位, 死亡率高居第2[1], 其主要原因是: 疾病的恶性增殖、复发转移和化疗耐药. 虽然, 围绕GC恶性增殖的机制研究取得了部分进展, 但应用于临床治疗的药物仍未获得满意的效果. 目前, 越来越多的研究表明miRNA在GC的发生发展中起到重要的调控作用, miRNA是由21-25个核苷酸组成的短链非编码RNA, 其与靶基因的3'端非翻译区(3' untranslated region, 3'-UTR)结合进而调节靶基因mRNA的表达和降解. Shrestha等[2]报道约有350余个miRNA在GC和正常黏膜中存在差异表达, 且有100余个miRNA在多篇文献被证实[3]. 有报道[4-7]指出, 上皮细胞转化序列2基因(epithelial cell transforming sequence 2 oncogene, ECT2)是与细胞增殖和凋亡相关的基因, 在多种恶性肿瘤中高表达, 与肿瘤的发生发展密切相关. 本研究通过生物信息学的方法发现ECT2和miR-223-3p存在特异性结合位点, 并通过细胞转染、Western blot和实时荧光聚合酶链反应法(real-time polymerase chain reaction, RT-PCR)等实验方法证实二者存正性调控关系. 同时选取80例临床标本在癌组织和癌旁组织中对ECT2和miR-223-3p的差异表达进行检测, 并探讨两者与GC临床病理特点的相关性及临床意义. 本文尚属国内外首次提出miR-223-3/ECT2轴同GC增殖凋亡的关系, 现将研究结果报道如下.
RPMI 1640培养液(Invitrogen公司)、胎牛血清美国(TBD公司); 鼠抗人ECT2、鼠抗人β-actin单克隆抗体(武汉博士德生物工程有限公司); 辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠免疫球蛋白G(immunoglobulin G, IgG), 免疫组织化学试剂盒(SP法)、浓缩型DAB试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司); PVDF膜(美国Millipore公司); TRIzol试剂、LipofectAMINE 2000转染试剂、miRNA提取试剂盒、反转录试剂盒和实时荧光定量PCR试剂盒(上海生工生物工程有限公司); miRNA-223类似物和抑制剂及其阴性对照(上海吉凯基因化学技术有限公司); PCR引物由上海生工生物工程股份有限公司合成; Annexin V-APC凋亡试剂盒(eBioscience公司), 碘化丙啶(propidium iodide, PI)试剂盒(Sigma公司).
1.2.1 细胞培养: 人胃腺癌细胞株SGC-7901、BGC-823及正常胃黏膜细胞GES-1取自锦州医科大学中心实验室. 于37 ℃、50 mol/L CO2培养箱中, 间隔2 d更换1次培养基.
1.2.2 组织标本: 本研究方案经本院医学伦理委员会审核通过. 本研究病例均取自锦州医科大学附属第三医院附属医院普通外科2016-01/2017-05行GC根治术的手术标本, 80例. GC患者中男67例, 女13例, 年龄33-75岁, 中位年龄62岁. 全部病例均经术后病理证为腺癌, TNM分期(UICC, 2010): Ⅰ期12例、Ⅱ期19例、Ⅲ期49例. 所有患者术前均未经化疗、放疗、靶向治疗等抗肿瘤治疗, 临床病理资料均完整.
1.2.3 靶基因预测: 生物信息学预测采用不同的网站: TargetScan(http://www.targetscan.org/), DIANA TOOLS(http://diana.imis.athena-innovation.gr/) and miRPathDB(https://mpd.bioinf.uni-sb.de/)[8]. 取交集发现ECT2是miR-223-3p的特异性结合位点.
1.2.4 细胞转染及实验分组: 取对数生长期的细胞进行转染, 按照LipofectamineTM 2000试剂说明书分别将miR-223-3p mimics、miR-223-3p inhibitor转染入SGC-7901细胞, 设空白对照组, 每个转染实验3个复孔. 分别取转录24、36、48 h的细胞进行转染效率验证, 选取合适转染时间.
1.2.5 RT-PCR: RT-PCR检测ECT2和miR-223在GC组织和细胞中的表达, 采用TRIzol法提取病理标本和细胞中的总RNA, 并检测RNA的纯度及浓度. 逆转录和PCR反应均严格按照TAKARA公司说明书进行, 以U6作为内参进行相对定量, 每组设3个复孔, 在ROCHE实时定量荧光PCR仪上进行检测. ECT2的上游引物序列为5'-GCCTTGCTTGTGAGGCCACCAA-3', 下游引物序列为5'-TCCACTGAGCCGTGGGATGTCA-3'; miR-223上游引物: 5'-TGGTGGACCTGACCTGCCGT-3', 下游引物: 5'-CAATGCCAGCCCCAGCGTCA-3'; U6的上游引物序列为5'-TTATGGGTCCTAGCCTGAC-3', 下游引物序列为5'-CACTATTGCGGGCTGC-3', 采用2-△△Ct法计算两者的相对表达量. △Ct = CtECT2--CtU6, △△Ct = △Ct癌组织-△Ct 癌旁正常组织.
1.2.6 Westren blot: 收集人胃腺癌细胞株SGC-7901、BGC-823及正常胃黏膜细胞GES-1, 分别提取细胞总蛋白, BCA法测定蛋白质浓度. 取20 μg/孔蛋白上样, 行8%SDS-PAGE(1 h), 电泳结束后将分离的蛋白条带转移至PVDF膜; 含5%脱脂奶粉的封闭液进行封闭, 分别加入鼠抗人ECT2多克隆抗体以及鼠抗人β-actin单克隆抗体(体积、稀释比例均为1:500), 4 ℃反应过夜; PBS洗膜3次, 加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG, 室温反应1 h; PBS洗膜3次, ECL试剂暗室曝光、压片. 以目的蛋白条带与内参β-actin条带灰度值之比表示目的蛋白的相对表达水平.
1.2.7 免疫组织化学: 标本于切下后半小时内取材, 分别取癌组织和癌旁组织, 癌组织均取自肿块中央非坏死部位, 癌旁组织距肿块边缘5 cm以上. 一部分标本用4%甲醛溶液固定, 石蜡包埋, 切片机切成4 μm厚的连续石蜡切片备用; 另一部分液氮速冻后-80 ℃冰箱保存. 光学显微镜购自奥林巴斯(Olympus)公司. 阴性对照以PBS替代一抗作为阴性对照, 用已知阳性标本作阳性对照, 已知阳性标本的表达情况的定量使用Image J软件进行阳性细胞计数.
烤片30 min, 切片常规脱蜡; 将切片浸于沸腾的柠檬酸缓冲液中用3%过氧化氢甲醇去除内源性酶; 血清封闭, 室温孵育30 min; 加入按1:500稀释的一抗兔抗ETC2多克隆抗体, 4 ℃过夜16 h; 室温孵育45 min; 加入二抗, PBS冲洗3次, 每次3 min; 甩干PBS液, 加羊抗小鼠抗体同辣根过氧化物酶复合物. 室温放置30 min, DAB显色, 苏木素复染、梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片.
1.2.8 免疫组织化学染色评分: 切片经2名病理科医生显微镜下阅片评分. 染色结果判定采用Remmele和Stegner[9]提出的免疫反应评分(immune response scores, IRS), 是染色强度(staining intensity, SI)和阳性细胞百分比(percentage of positive cells, PP)的乘积, 即IRS = SI×PP. SI可分为4级, 即0级为未见阳性细胞; 1级为弱阳性; 2级为中等阳性; 3级为强阳性. PP可分为5级, 即0级为阴性; 1级≤30%; 2级31%-50%; 3级51%-80%; 4级>80%. 从每一样本的不同区域随即抽取10个视野进行IRS评估, IRS的平均数作为最终值.
1.2.9 PI-FACS细胞周期: 细胞生长至覆盖率约为80%时(细胞未进入生长平台期), 收集细胞, 胰酶消化, 完全培养基重悬成细胞悬液, 收集细胞于5 mL的离心管中, 每组设3个复孔. 1300 r/min离心5 min, 弃上清, 4 ℃预冷的D-Hanks(pH = 7.2-7.4)洗涤细胞沉淀1次. 1300 r/min离心5 min, 4 ℃预冷的75%乙醇固定细胞至少1 h. 1300 r/min离心5 min去固定液, D-Hanks洗涤细胞沉淀一次. 细胞染色液配制: 40×PI母液(2 mg/mL); 100×RNase母液(10 mg/mL); 1×D-Hanks = 25:10:1000.
细胞染色: 根据细胞量, 加入一定体积的细胞染色液(0.6-1.0 mL)重悬, 使上机时细胞通过率为300-800 Cell/s. 上机检测, 数据分析.
1.2.10 Annexin V-APC单染色流式细胞仪检测细胞凋亡: 待各实验组6孔板细胞生长至覆盖率约为80%时, 收集细胞, 胰酶消化, 完全培养基重悬成细胞悬液, 与上清细胞收集于同一5 mL离心管中, 每组设3个复孔. 1300 r/min离心5 min, 弃上清, 4 ℃预冷的D-Hanks(pH = 7.2-7.4)洗涤细胞沉淀. 1×binding buffer洗涤细胞沉淀一次, 1300 r/min、3 min离心, 收集细胞. 200 μL 1×binding buffer重悬细胞沉淀. 加入10 μL Annexin V-APC染色, 室温避光10-15 mins. 根据细胞量, 补加400-800 μL 1×binding buffer, 上机检测.
统计学处理 采用SPSS19.0统计软件对数据进行处理与分析. 所有实验均独立重复3次以上. 组间比较采用Pearson χ2检验或Fisher确切概率法; 两组间均数比较运用t检验, 数据采用mean±SD表示; 相关性分析采用非参数Spearman等级相关检验. P<0.05为差异有统计学意义.
Western blot和RT-PCR结果显示(图1A, B), 与正常胃黏膜细胞GSE-1相比, GC细胞SGC-7901和BGC-823中ECT2的蛋白和mRNA明显呈过表达, 差异具有统计学意义(P<0.05). RT-PCR结果显示miR-223-3p在SGC-7901和BGC-823中的表达也显著高于其在GSE-1中的表达(图1C, P<0.05).
GC患者癌组织中ECT2阳性表达率为80.0%(64/80), 癌旁组织中ECT2阳性表达率为20%(16/80), 癌组织中ECT2阳性表达率显著高于癌旁组织, 差异有统计学意义(P<0.05). ECT2在GC组织中阳性信号表现为棕黄色深染颗粒, 癌旁组织中阳性染色多呈淡黄色(图2A).
RT-PCR检测结果显示(图2B, C), 80例配对GC癌组织中miR-223-3p、ECT2的相对表达量为明显高于癌旁组织, 差异有统计学意义(P<0.05). GC组织中miR-223-3p和ECT2 mRNA水平的相关性分析结果呈正相关性(图2D).
GC组织中, ECT2蛋白表达与GC的分化程度、Lauren分型相关(P<0.05), 与TNM分期密切相关(P<0.01), 与患者的性别、年龄、肿瘤直径、Bormann分型无明显相关(P>0.05, 表1).
| 临床病理因素 | n | ECT2蛋白表达 | P值 | |
| 阳性 | 阴性 | |||
| 性别 | 0.063 | |||
| 男 | 67 | 57 (85.1) | 10 (14.9) | |
| 女 | 13 | 7 (53.8) | 6 (46.2) | |
| 年龄(岁) | 0.653 | |||
| ≥60 | 44 | 36 (81.8) | 8 (18.2) | |
| ＜60 | 36 | 28 (77.8) | 8 (22.2) | |
| Bormann分型 | 0.074 | |||
| Ⅰ | 3 | 1 (33.3) | 2 (66.7) | |
| Ⅱ | 34 | 25 (73.5) | 9 (26.5) | |
| Ⅲ | 42 | 37 (88.1) | 5 (11.9) | |
| Ⅳ | 1 | 1 (100) | 0 (0) | |
| 肿瘤大小(cm) | 0.091 | |||
| ≥5 | 35 | 31 (88.6) | 4 (11.4) | |
| <5 | 45 | 33 (73.3) | 12 (26.7) | |
| 肿瘤位置 | 0.594 | |||
| 上部 | 21 | 18 (85.7) | 3 (14.3) | |
| 中部 | 13 | 11 (84.6) | 2 (15.4) | |
| 下部 | 46 | 35 (76.1) | 11 (23.9) | |
| Lauren分型 | 0.033 | |||
| 肠型 | 42 | 29 (69.0) | 13 (31.0) | |
| 混合型 | 18 | 16 (88.9) | 2 (11.1) | |
| 弥漫型 | 20 | 19 (95.0) | 1 (5.0) | |
| 分化程度 | 0.043 | |||
| 高中分化 | 29 | 20 (69.0) | 9 (31.0) | |
| 低未分化 | 51 | 44 (86.3) | 7 (13.7) | |
| TNM分期 | 0.000 | |||
| Ⅰ | 12 | 0 (0) | 12 (100) | |
| Ⅱ | 19 | 15 (78.9) | 4 (21.1) | |
| Ⅲ | 49 | 49 (100) | 0 (0) | |
在SGC-7901细胞中转染miR-223-3p mimics和inhibitor, 进行RT-PCR实验, 结果显示: 转染24 h后, miR-223-3p mimics组与未处理(NC)组比较, miR-223-3p mimics组miR-223-3p明显上调(P<0.01); miR-223-3p inhibitor组与NC组比较, miR-223-3p inhibitor组明显抑制miR-223-3p的表达(P<0.01). 转染36 h后, miR-223-3p mimics组与NC组比较, miR-223-3p mimics组miR-223-3p明显上调(P<0.05); miR-223-3p inhibitor组与NC组比较, miR-223-3p inhibitor组明显抑制miR-223-3p的表达(P<0.05). 转染48 h后, miR-223-3p mimics组与NC组比较, miR-223-3p inhibitor组与NC组比较, 差异均无统计学差异(P>0.05, 图3). 选取转染24 h为后续实验的转染时间节点.
在SGC-7901细胞中转染miR-223-3p mimics和inhibitor 24 h后, 采用Western blot检测SGC-7901细胞中ECT2的表达情况(图3), 发现在加入miR-223-3p mimics的细胞中ECT2的表达明显上调(P<0.05), 而在加入miR-223-3pinhibitor的细胞中ECT2的表达明显下调(P<0.05), 说明miR-223-3p对ECT2存在正性调控关系.
如表2和图4所示细胞周期的变化. miR-223-3p inhibitors转染组S期细胞明显低于NC组S期细胞, 差异有统计学意义(P<0.05). 该转染组G1期细胞, 明显高于其NC组G1期细胞(P<0.05).
| S期 | G1期 | PI | 凋亡率 | |
| Inhibitor | 24.12 ± 3.25 | 62.15 ± 4.30 | 37.85 ± 4.30 | 6.25 ± 0.09 |
| NC | 30.01 ± 3.58 | 45.74 ± 3.15 | 54.26 ± 3.15 | 4.50 ± 0.18 |
如表2和图5所示细胞凋亡的变化. miR-223-3p inhibitors转染组细胞凋亡率明显高于NC组细胞凋亡率(P<0.05).
ECT2首先由Miki等[10]发现, 证明其具有诱导正常上皮细胞癌变的生物学特点. ECT2位于人染色体3q26, 由883个氨基酸组成, ECT2是Rho家族(RhoA、Rac1、Cdc42)GTP酶鸟嘌呤核苷酸解离交换因子, 该家族对细胞分裂的调控至关重要[11], 使细胞周期保持动态平衡. 细胞的无限增殖是肿瘤的重要特点, 而ECT2因为其在细胞周期中的重要作用, 同肿瘤的发生发展联系到一起[12], 多项研究[13-15]表明, ECT2在诸如非小细胞肺癌、胰腺癌、乳腺癌细胞系和组织中呈过表达. 一项在非小细胞肺癌的研究[16]中发现, ECT2通过激活下游的Rac1, 从而上调PKC-Par6引起细胞的增殖变化. 本研究应用Western blot、RT-PCR和免疫组织化学证实, ECT2在GC细胞和组织中均呈过表达, 回顾80例GC患者的临床资料, 通过免疫组织化学证实ECT2的表达与患者的临床分期, 淋巴结转移和肿瘤的分化程度密切相关, 这也进一步说明ECT2在GC的发生发展中起到了重要作用, 是GC发生的一个重要基因.
寻找ECT2的上游调控机制是当务之急, 我们通过多个生物信息学的靶基因网站对ECT2的相关miRNA进行筛查, 取交集发现miR-223-3p很可能是ECT2的重要调控元件. miRNA不直接参与编码蛋白, 其主要作用机制是与靶基因mRNA的3'-UTR相结合, 在转录后水平调节靶基因表达, 参与细胞增殖、分化、凋亡等多种生物学过程. 目前研究[17]认为, miRNA至少参与调节5000个以上基因及30%以上蛋白质表达. miR-223首先因其在造血系统中高表达而被报道[18,19]. 随后的进一步相关研究表明, miR-223-3p在GC[20]等多种实体瘤中高表达[21-23]是一致癌miRNA. 曾有文献报道[24]miR-223-3p/ECT2轴在骨肉瘤的发生和增殖中起重要作用.
本文在国内外首次提出miR-223-3p/ECT2轴在GC细胞周期和凋亡中的作用. 两者在GC细胞和组织中均呈高表达, 且存在线性相关, 并且同患者的病理分期、Lauren分型、分化类型等病理预后因素密切相关. 通过细胞转染的手段干扰miR-223-3p的表达, 发现在GC细胞中, 上调miR-223-3p的表达后ECT2呈过表达; 而抑制miR-223-3p的表达后ECT2的表达也随之下调; 并且因为miR-223-3p的表达降低, ECT2介导的细胞周期和细胞凋亡也呈相应改变, 转染的细胞出现G1/S期阻滞, 增殖受到抑制, 凋亡细胞明显增加.
总之, miR-223-3p通过调节ECT2的表达, 从而影响GC细胞的细胞周期和凋亡, 在GC的发生发展中起到重要作用. 在后续的研究中, 通过更进一步的实验去验证两者之间存在的直接调控关系. 同时, 扩大临床样本量, 综合分析两者同患者预后的潜在临床意义, 为GC的分子治疗提供新靶标.
胃癌(gastric cancer, GC)是常见的消化系统恶性肿瘤, 发病率在我国位居第4位, 死亡率高居第2. 虽然, 围绕GC恶性增殖的机制研究取得了部分进展, 但应用于临床治疗的药物仍未获得满意的效果.
寻找GC恶性增殖相关的特异性分子靶标、特异性分子调控通路, 为GC的分子治疗提供新靶标.
探讨miRNA-223-3p和上皮细胞转化序列2基因(epithelial cell transforming sequence 2 oncogene, ECT2)在GC细胞周期和凋亡中的作用和相关机制, 并探讨其与GC临床病理因素的相关性及临床意义.
通过生物信息学的方法预测了miRNA-223-3p和ECT2两者的相关作用关系. 采用了RT-PCR、Western blot、免疫组织化学等方法对预测结果从基因水平、蛋白水平; 细胞水平、组织水平进行了表达验证, 并通过流式细胞仪对细胞周期和凋亡表型进行了验证. 同时, 将ECT2的表达同GC组织样本的生物学特点进行了统计分析.
GC细胞中ECT2和miR-223-3p的表达水平均较胃黏膜明显升高(P<0.05); GC组织中ECT2阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05); 两者表达均与GC的分化程度、Lauren分型相关(P<0.05), 与TNM分期密切相关(P<0.01); 两者之间表达呈显著正相关(P<0.05); 两者影响GC细胞的增殖表型(P<0.05). 本研究的顺利实施为后续进一步探索ECT2相关的GC恶性增殖提供思路. 为进一步明确GC发生发展提供了一种可行性探索.
本研究发现并提出miR-223-3p是一种与GC细胞周期和凋亡密切相关的miRNA分子, 他可以通过影响ECT2的表达来调节GC细胞的细胞周期和凋亡. 并且进一步证明了非编码RNA参与肿瘤发生发展这一论点. 同时本文第一次就miR-223-3p/ECT2信号轴参与GC恶性增殖进行报道. 回顾文献, miRNA同mRNA负向调控文献较多, 而两者正向调控的文章相对较少, 本文为进一步确认miRNA同mRNA的互作关系提供论据. 总之, 研究认为ECT2和miR-223-3p可以作为反映GC生物学行为的有效指标, 为后续进一步深入的机制研究提供了坚实的理论基础.
在后续研究中, 首先, 本研究组将继续扩大样本量, 对已知研究结论进行进一步验证; 同时, 结合患者血液样本检测, 实施基础向临床的转化; 再次, 我们仍需进一步证明本文中biomarkers的直接作用关系, 并且进一步探索已获得分子通路的上下游调控机制.
手稿来源: 自由投稿
学科分类: 胃肠病学和肝病学
手稿来源地: 辽宁省
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编辑:马亚娟 电编:杜冉冉
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