基础研究 Open Access
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世界华人消化杂志. 2017-06-18; 25(17): 1543-1552
在线出版日期: 2017-06-18. doi: 10.11569/wcjd.v25.i17.1543
MNNG在大鼠胃癌前期病变造模中的量效关系
吴娟, 王婷, 魏睦新
吴娟, 王婷, 魏睦新, 南京医科大学第一附属医院中医科 江苏省南京市 210029
魏睦新, 南京医科大学中西医结合研究所 江苏省南京市 210029
吴娟, 在读硕士, 主要从事消化系统疾病的基础与临床研究.
作者贡献分布: 魏睦新完成本项目的总体策划设计与全文审定; 吴娟主要完成实验设计、数据分析及论文撰写; 王婷主要参与实验研究与部分数据处理.
基金项目: 江苏省中医药局科学研究基金资助项目, No. YB2015166; 横向合作课题中药颗粒剂运用探索, No. 2016/303070202KA16.
通讯作者: 魏睦新, 教授, 主任医师, 210029, 江苏省南京市广州路300号, 南京医科大学第一附属医院中医科, 南京医科大学中西医结合研究所. weimuxin@njmu.edu.cn
电话: 025-68136267
收稿日期: 2017-03-20
修回日期: 2017-05-03
接受日期: 2017-05-05
在线出版日期: 2017-06-18

目的

观察N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine, MNNG)不同的给药途径和剂量对SD大鼠胃癌前期病变造模中的胃黏膜组织的病理学影响.

方法

150只体质量80-100 g的SD♂大鼠随机分成6组, 空白对照自由饮组, 空白对照灌胃组, MNNG低浓度组, MNNG中浓度组, MNNG高浓度组, MNNG灌胃组, 各组均为25只. 低、中、高浓度组分别采用50、100、150 μg/mL的MNNG自由饮, 3组联合使用高Na饮水(15%NaCl饮水)、饥饱失常、雷尼替丁加工饲料造模; 灌胃组在低浓度组的基础上, 每日以0.017 mol/L的MNNG溶液灌胃(根据不同时期体质量计算灌胃量). 连续28 wk, 比较各组大鼠的一般情况、组织病理学变化情况, 并且运用免疫组织化学的方法, 测定各组胃黏膜组织Bcl-2的表达.

结果

低浓度组大鼠, 鳞状上皮改变较多, 发生率为28%, 仅炎性改变的为11例; 中浓度组大鼠, 萎缩肠化的发生率为65.2%, 少数发生鳞状上皮改变; 高浓度组大鼠发生萎缩、肠化、鳞状上皮化生以及癌变(鳞癌), 其中癌变率为33.4%, 诱变率为85.7%; 灌胃组大鼠, 在低浓度组的基础上, 每日以0.017 mol/L的MNNG溶液灌胃(根据不同时期体质量计算灌胃量), 发生萎缩、肠化、鳞状上皮化生以及癌变, 诱变率为84.2%. 免疫组织化学法检测Bcl-2, 呈现与MNNG造型药物浓度相关的高表达.

结论

在MNNG的诱导下, 联合饲喂雷尼替丁饲料、饥饱失常、高Na饮水、灌胃, 可以成功诱导出大鼠萎缩、肠化、萎缩伴肠化的模型.

关键词: N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍; 灌胃; 萎缩肠化

核心提要: 本文主要通过大鼠的N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍造模实验, 诱发大鼠建立实验性慢性萎缩性胃炎(chronic atrophie gastritis, CAG)模型; 主要模拟人类不当摄入硝酸盐在胃内转化为亚硝酸胺等致癌物质, 从而导致CAG、癌前病变甚至胃癌的发生.
引文著录: 吴娟, 王婷, 魏睦新. MNNG在大鼠胃癌前期病变造模中的量效关系. 世界华人消化杂志 2017; 25(17): 1543-1552
Dose-effect correlation of N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine in inducing gastric precancerous lesions in rats
Juan Wu, Ting Wang, Mu-Xin Wei
Juan Wu, Ting Wang, Mu-Xin Wei, Department of Traditional Chinese Medicine, the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University, Nanjing 210029, Jiangsu Province, China
Mu-Xin Wei, Institute of Integrative Medicine, Nanjing Medical University, Nanjing 210029, Jiangsu Province, China
Supported by: Scientific Research Foundation of Jiangsu Provincial Administration Bureau of Traditional Chinese Medicine, No. YB2015166; Horizontal Project of the Exploration of Application of Traditional Chinese Medicine Granules, No. 2016/303070202KA16.
Correspondence to: Mu-Xin Wei, Professor, Chief Physician, Department of Traditional Chinese Medicine, the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University; Institute of Integrative Medicine, Nanjing Medical University, 300 Guangzhou Road, Nanjing 210029, Jiangsu Province, China. weimuxin@njmu.edu.cn
Received: March 20, 2017
Revised: May 3, 2017
Accepted: May 5, 2017
Published online: June 18, 2017

AIM

To observe the pathological effect of different doses of N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) via different administration routes on rat gastric mucosa in inducing gastric precancerous lesions.

METHODS

A total of 150 SD male rats weighing 80-100 g were randomly and equally divided into six groups: A-F. Group A was given water, group B was gavaged with normal saline, groups C-E were given low-, medium- and high-dose MNNG in water (50, 100, and 150 μg/mL) and fed a diet containing ranitidine, and group F was gavaged with 0.017 mol/L MNNG on the basis of the regimen for group C. After 28 wk, general situation and histopathological changes were compared between each group. Immunohistochemical method was used to detect the expression of Bcl-2 in gastric mucosal tissue.

RESULTS

In the low-dose group, 28% of rats developed squamous epithelial changes and 11 rats showed only inflammatory changes. In the medium-dose group, 65.2% of rats developed atrophy and intestinal metaplasia, and only a few rats showed changes in the squamous epithelium. Rats in the high-dose group developed atrophy, intestinal metaplasia, squamous metaplasia, and canceration (squamous cell carcinoma), with a canceration rate of 33.4% and induction rate of 85.7%. Rats in the MNNG gavage group developed atrophy, intestinal metaplasia, squamous metaplasia and canceration, demonstrating an induction rate of 84.2%. MNNG up-regulated Bcl-2 expression in gastric mucosal tissue in a dose-dependent manner.

CONCLUSION

Atrophy, intestinal metaplasia, and atrophy with intestinal metaplasia could be successfully induced with MNNG combined with other treatments. A relatively higher induction rate was observed in the high-dose MNNG group and MNNG gavage group.

Key Words: MNNG; Gavage; Atrophy and intestinal metaplasia
0 引言

胃癌前病变(precancerous lesions of gastric cancer, PLGC)是胃癌进展过程中的重要病理学概念, 指胃黏膜某些病理学改变较易转变成胃癌, 包括肠上皮化生(intestinal metaplasia, IM)和异型增生(dysplasia, Dys)或上皮内瘤变(intraepithelial neoplasia, IN)[1]. 目前, 我国胃癌发病率居全球第2位[2], 且死亡人数约占全球胃癌死亡总人数的1/4[3], 因此, PLGC的早期预防诊断尤为重要[4]. 由于胃癌发生的分子机制目前尚不清楚, 所以胃癌癌前病变与胃癌的发生关系成了目前的研究热点[5]. 人们试图寻找好的诊断方法来及早发现癌前病变、并通过对其干预治疗来阻断胃癌发生. 所以及早发现癌前病变, 阻断其进一步发展, 可以有效降低胃癌发生率. 近年来, PLGC在基础研究取得了长足的发展, 但是在大鼠胃癌前期病变造模方法尚未完善. 本文在N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine, MNNG)在大鼠胃癌前期病变造模中的量效相关性观察, 探索出最适合的造模方法.

1 材料和方法
1.1 材料

实验动物: SPF级SD健康♂大鼠150只, 体质量80-100 g, 购自上海斯莱克实验动物有限公司; 实验试剂与器材: MNNG(批号MV340-MJ, 日本东京化成工业株式会社); 雷尼替丁(批号121119, 江苏黄河药业股份有限公司); 氯化钠(批号20150519, 国有集团化学试剂有限公司); 水合氯醛(批号20120522, 国有集团化学试剂有限公司); 4%中性多聚甲醛(武汉谷歌生物科技有限公司). 全自动封闭式组织脱水机TSJ-QX(常州中威); 病理组织包埋冷冻台BMJ-A(常州中威); 病理组织漂烘仪PHY-Ⅲ(常州中威); 超纯Millis-QSynthesis(美国MILLIPORE). Bcl-2单克隆抗体, Bcl-2的免疫组织化学试剂盒. Bradford法蛋白含量检测试剂盒, 均由凯基生物科技发展有限公司提供. 试剂配制: (1)MNNG自由饮溶液[6]: 每周用150 mL无水乙醇完全溶解5 g MNNG, 再用去离子水配制成1 g/L的母液, 4 ℃避光保存, 临时用蒸馏水稀释成150、100、50 μg/mL(每24 h更换1次)供大鼠自由饮, 饮水瓶用黑色常规纸袋包裹以避光; (2)MNNG灌胃液: 每周将2.5 g MNNG溶解于800 mL去离子水中, 缓慢加入10 g羟甲基纤维素, 不断搅拌成悬浮液, 再定容至1 L, 4 ℃避光保存; (3)含雷尼替丁饲料: 委托南京青龙山饲料加工厂加工生产含0.03%雷尼替丁SPF级饲料; (4)15%NaCl溶液: 将15 g NaCl完全溶解于80 mL蒸馏水中, 再定容至100 mL, 4 ℃保存.

1.2 方法

1.2.1 实验分组及造模: 150只SD健康♂大鼠, 先适应性正常饲料饲喂1 wk后, 随机分成6组, 空白对照自由饮组、空白对照灌胃组、MNNG高浓度组、MNNG中浓度组、MNNG低浓度组、MNNG灌胃组, 各组均为25只. (1)空白对照组, 饲喂正常SPF级饲料, 饮用净水, 饥饱失常(每进食2 d, 禁食1 d); (2)空白对照灌胃组, 饲喂与空白组相同, 每日上午9:00给予生理盐水灌胃, 根据不同时期大鼠体质量决定灌胃量(<200 g, 一次灌胃0.5 mL; >200 g, 一次灌胃1 mL; >300 g, 一次灌胃1.5 mL); (3)低浓度组, 饲喂SPF级0.03%雷尼替丁饲料, 饮用水为50 μg/mL的MNNG溶液, 饥饱失常每日上午9:00给予生理盐水灌胃, 剂量于方法同上; (4)中浓度组, 饲喂方法与低浓度组相同, 饮用水为100 μg/mL的MNNG溶液; (5)高浓度组, 饲喂方法与低浓度组相同, 饮用水为150 μg/mL的MNNG溶液; (6)灌胃组, 在低浓度组的基础上, 每日上午9:00给予0.017 mol/L的MNNG溶液灌胃. 分别在第16、20、24、28周末, 各组随机抽取2只大鼠宰杀, 取出组织, 在4%的多聚甲醛中性固定液中固定24 h, 常规石蜡包埋, 切片, 苏木精-伊红染色, 在光学显微镜下观察组织病理学变化.

1.2.2 病理诊断评定标准: 对CAG的病理诊断参照《诊断病理学》[7]及2012年上海全国慢性胃病诊治共识会议通过的《中国慢性胃炎共识意见》进行诊断和程度分级[8].

1.2.3 免疫组织化学法检测Bcl-2: Bcl-2单克隆抗体, SP免疫染色剂试剂盒均依照试剂盒所示步骤, 进行严格操作. 用中性PBS作为空白对照, 与已知的阳性胃癌前期病变胃黏膜组织作为阳性对照, Bcl-2定位于胞质或胞膜上. 在电镜下棕黄色或棕褐色颗粒清晰可见, 则可将此标记为阳性细胞. 在观察过程中需要将每张切片都设定在5高倍视野, 并且要求每视野计数100个细胞中的阳性表达. 连续读取3次再取其平均值, 以百分数表示阳性细胞指数. 根据染色强度: 阳性细胞<10%为阴性(-), 25%-50%记为弱阳性(+), 51%-75%记为中等阳性(++), >76%标记为强阳性(+++).

统计学处理 实验数据使用SPSS19.0统计软件, 进行采用χ2检验, P<0.05为差异具有统计学意义.

2 结果
2.1 大鼠的一般情况

空白组和空白灌胃组, 大鼠皮毛光泽, 体型健硕, 活动及进食良好, 体质量增长正常, 粪便呈颗粒状, 无死亡; 模型组, 大鼠皮毛稀疏、枯槁, 体型瘦削, 活动迟缓, 进食少, 粪便偏软、时不成形, 部分大鼠腹部膨隆, 体质量增长缓慢, 灌胃时观察, 大鼠舌色偏紫, 更换垫料时, 气味较空白组偏臭, 以上现象高浓度组和灌胃组出现情况相对较早.

2.2 大鼠体质量变化情况

空白组和空白对照组大鼠体质量平稳增长, 20 wk后趋于平稳, 体质量基本保持550 g到650 g之间; 造模组大鼠体质量增长相对较为缓慢, 20 wk后, 体质量大多维持在280 g到450 g之间; 其中极个别高浓度组和低浓度灌胃组体质量偏轻, 后期体质量偏低的大鼠死亡率较高(图1).

图1
图1 大鼠28 wk体质量变化曲线图.
2.3 胃黏膜肉眼观察

空白组和空白灌胃组, 大鼠胃黏膜皱襞色泽、走向正常, 胃壁有弹性, 胃壁表面有少量黏液附着; 低浓度组大鼠, 大鼠胃黏膜皱襞色泽、走向正常, 胃壁弹性较好; 中浓度组大鼠, 胃黏膜皱襞教高浓度明显, 胃壁弹性较好, 黏膜上附着少量黏液高浓度组大鼠, 胃黏膜色泽暗淡, 胃壁变薄, 皱襞相对减少, 部分黏膜上有少量息肉, 部分胃黏膜有菜花样肿瘤, 胃体部分有少量出血点; 灌胃组, 胃皱襞不明显, 胃黏膜变薄, 毛细血管网清晰可见(图2).

图2
图2 6组大鼠胃黏膜在肉眼下的观察. A: 空白组大鼠胃; B: 空白灌胃组大鼠胃; C: 低浓度组大鼠胃; D: 中浓度组大鼠胃; E, F: 高浓度组大鼠胃; G, H: 灌胃组大鼠胃.
2.4 组织病理学变化

空白组大鼠, 浅表性胃炎4例, 其余大多正常, 无病理组织学改变. 空白灌胃组, 慢性浅表性胃炎7例, 无病理组织学改变(图3). 低浓度组大鼠, 鳞状上皮改变较多, 发生率为28%, 仅炎性改变的为11例, 诱变率偏低; 中浓度组大鼠发生萎缩肠化的较多, 发生率为65.2%, 少量发生鳞状上皮改变; 高浓度组大鼠发生萎缩、肠化、鳞状上皮化生以及癌变(鳞癌), 其中癌变率为33.4%, 较其他组偏高, 诱变率为85.7%; 灌胃组大鼠发生萎缩、肠化、鳞状上皮化生以及癌变, 诱变率为84.2%. 高浓度组大鼠发生萎缩、肠化、鳞状上皮化生以及癌变(鳞癌), 其中癌变率为33.4%, 较其他组偏高, 诱变率为85.7%(表1, 图4, 图5).

表1 实验28 wk后6组大鼠胃黏膜组织病理学变化.
分组有效动物数萎缩肠化萎缩伴肠化鳞状上皮化生癌变仅炎症改变诱变率(%)
空白对照组2500000250
空白灌胃组2500000250
高浓度组2125317385.7beg
中浓度组23210320673.9bc
低浓度组25124701156bce
灌胃组1934432384.2bceg
bP<0.01 vs 空白对照组;
cP<0.05 vs 高浓度组;
eP<0.05 vs 中浓度组;
gP<0.05 vs 低浓度组.
图3
图3 空白组和空白灌胃组胃黏膜组织病理学变化(×200). A, B: 空白组. 正常的胃体黏膜; C, D: 空白灌胃组. 胃体黏膜正常, 有炎症充血.
图4
图4 低浓度组(A-D)、中浓度组(E, F)和高浓度组(G, H)胃黏膜组织病理学变化(×200). A: 轻度肠化; B: 萎缩伴淋巴组织增生; C: 鳞状上皮化生; D: 鳞状上皮化生; E: 萎缩伴肠化; F: 重度萎缩伴肠化; G: 鳞形细胞癌; H: 重度萎缩肠化伴轻度不典型增生.
图5
图5 灌胃组胃黏膜组织病理学变化(×200). A, B: 重度萎缩伴肠化.
2.5 免疫组织化学法检测Bcl-2

Bcl-2蛋白正常大鼠胃黏膜Bcl-2阳性表达率较低. 空白组和空白灌胃组大鼠, 胃黏膜Bcl-2阳性表达率较低(图6); 高浓度组和灌胃组大鼠, 胃黏膜Bcl-2阳性表达率较高(图6); 中浓度组大鼠, 胃黏膜Bcl-2阳性表达率相对较高(图6); 低浓度组大鼠, 胃黏膜Bcl-2阳性表达率相对较低(表2, 图6).

表2 实验28 wk后6组大鼠胃黏膜免疫组织化学Bcl-2检测结果.
分组nBcl-2表达例数
总表达率n(%)
(-)(+)(++)(+++)
空白组25241001(4.00)
空白对照灌胃组25232002(8.00)
高浓度组21359418(85.71)beg
中浓度组235610218(78.26)bc
低浓度组251086115(60.00)bce
灌胃组19248517(89.47)bceg
bP<0.01 vs 空白对照灌胃组;
cP<0.05 vs 高浓度组;
eP<0.05 vs 中浓度组;
gP<0.05 vs 低浓度组.
图6
图6 Bcl-2蛋白在胃黏膜不同病理改变的免疫组织化学染色(20×10). A, B: 空白组正常胃黏膜; C, D: 高浓度组胃黏膜明显萎缩、肠化胃黏膜; E-H: 中浓度组胃黏膜萎缩、肠化胃黏膜(见浸润); I-L: 低浓度组胃黏膜少量萎缩、肠化胃黏膜(未见浸润).
2.6 造模过程中大鼠死亡情况

空白组和空白灌胃组, 大鼠无自然死亡; 低浓度组无自然死亡; 中浓度组, 在第17周死亡2只, 死亡率为8%; 高浓度组, 在第12、13、16周, 分别死亡1、1、2只, 死亡率为16%; 灌胃组, 分别在第10、12、15、18周死亡1、2、2、1只, 死亡率为24%. 死亡后的大鼠, 对死亡时间相对不长的大鼠进行尸检. 中浓度大鼠, 死亡后尸检未见明显异常; 高浓度组, 大鼠腹部膨隆, 胃肠胀气明显, 四肢消瘦, 胃部切开, 有明显出血点, 胃黏膜有散在息肉, 16 wk死亡大鼠, 其肝脏部位有散在病灶; 灌胃组大鼠, 15 wk死亡大鼠, 胃黏膜明显变薄, 毛细血管网清晰可见.

3 讨论

在MNNG的诱导下, 联合饲喂雷尼替丁饲料、饥饱失常、高Na饮水、灌胃, 可以成功诱导出大鼠萎缩、肠化、萎缩伴肠化的模型, MNNG自由饮高浓度组大鼠以及MNNG灌胃组大鼠诱变率相对较高, 并出现癌变. MNNG中浓度组大鼠, 虽然诱变率相对略低, 但是, 萎缩肠化的病变率较高, 大鼠死亡率相对较低, 所以, 在诱导大鼠萎缩肠化的病变造模中, 饲喂SPF级0.03%雷尼替丁饲料, 饮用水为100 μg/mL的MNNG溶液, 饥饱失常每日上午9:00给予生理盐水灌胃(<200 g, 一次灌胃0.5 mL; >200 g, 一次灌胃1 mL; >300 g, 一次灌胃1.5 mL)的造模方式为最佳. 免疫组织化学法检测Bcl-2, 呈现与MNNG造型药物浓度相关的高表达.

慢性萎缩性胃炎(chronic atrophie gastritis, CAG), 是一种消化系统常见病, 世界卫生组织将其列为胃癌前状态, 是指胃黏膜某些病理学改变较易转变成胃癌, 萎缩性胃炎经常伴随有IM和Dys或IN[1], 这时被定义为胃癌前期病变, 癌变概率进一步加大[9]. 依据Correa提出的经典假说[10], 肠型胃癌的演化模式为: 正常胃黏膜-慢性非萎缩性胃炎-多灶性萎缩性胃炎-完全性(小肠型)IM-不完全性(大肠型)IM-轻度Dys-重度Dys-侵袭性腺癌[11]. 如何能够准确建立胃癌前期病理模型, 如何体现病理的演变过程, 是一个值得探索的课题.

MNNG是一种化学诱变剂和致癌剂[12,13], 诱发大鼠建立实验性CAG模型; 主要模拟人类不当摄入硝酸盐在胃内转化为亚硝酸胺等致癌物质[12], 从而导致CAG、癌前病变甚至胃癌的发生[13]; 他是一种不依赖于酶的代谢作用, 能够直接作用于胃肠道黏膜, 引起癌变的活性致癌剂, 其致癌机制可能是导致细胞DNA的损伤而引发癌症, 故常被用来诱发实验性胃癌或癌前病变[14]. 在MNNG的诱导下, 饥饱失常、高Na饮食等作用下, 模拟人类不健康饮食习惯, 反复刺激胃黏膜, 同时, 在雷尼替丁抑制胃酸分泌的条件下, 造成胃内弱酸环境, 促使硝酸盐转化为亚硝酸盐, 从而加速MNNG的诱变作用, 诱发大鼠建立CAG模型[15-17].

Bcl-2基因是1984年首次从滤泡性淋巴瘤细胞中分离出来的一种癌基因为细胞凋亡的拮抗基因, 主要定位于核膜、内质同和线粒体的内层质膜[18]. 近来研究[19,20]发现, Bcl-2蛋白家族是主要的细胞凋亡调节因子, 在线粒体信号通路中起到了调制点的作用. 其主要作用是抑制细胞凋亡, 表达增高则延缓细胞凋亡的发生, 细胞存活周期则相应的拉长, 表现为抗细胞凋亡. Bcl-2在正常胃黏膜上黏膜基底层底部隐窝上皮处有少量表达, 由于未达到阳性标准固常被标记为阴性. 随着肠上皮不典型增生程度的加重, Bcl-2表达也随之增加, 但并未随着IM的不断加重而无限增加其表达, 约至高分化腺癌时达到表达最高峰(约70%), 其后随着胃癌分化程度开始降低, Bcl-2蛋白的表达也出现下降. 可推测, Bcl-2可能与早期胃癌形成有关, 甚至可作为早期胃癌诊断标准之一.

尽管MNNG在胃癌造模中的作用, 已经明确, 但是如何控制剂量, 还是一个难题. 进一步寻找用MNNG为主, 结合其他临床常见影响因素, 在实验动物, 造出从胃癌前期到胃癌的不同病理阶段的模型, 是一个非常有创意和有意义的探索研究. 目前国内同类研究尚很少见有报道.

本实验根据不同的MNNG给药剂量和途径, 将模型组分为高浓度组、中浓度组、低浓度组和灌胃组, MNNG对大鼠的胃黏膜刺激有着不同的影响. 实验28 wk后, 高浓度大鼠胃黏膜组织病理部分出现鳞形细胞癌, 重度萎缩伴肠化; 中浓度组大鼠胃黏膜组织病理大部分出现中度萎缩伴肠化; 低浓度大鼠胃黏膜组织病理部分出现鳞状上皮化生, 少部分出现腺体细胞减少, 即轻度萎缩, 部分出现杯状细胞(IM)周围腺体正常, 即轻度肠化; 灌胃组大鼠胃黏膜组织病理部分出现重度萎缩伴肠化. 实验中, 为了更好地验证PLGC模型的渐变关系, 用免疫组织化学法检测Bcl-2, 根据其不同的表达情况, 以判断出造模大鼠在不同组中, 大鼠PLGC的情况. 根据不同MNNG剂量的探索, 以及给药途径的不同, 了解到CAG伴IM动物模型造模中所适合的给药剂量和给药途径.

我们还在传统的MNNG低剂量自由饮的基础上, 增加高浓度组自由饮、中浓度组自由饮、灌胃组, 以保证MNNG的摄入量, 联合模拟人类不健康的饮食习惯, 探索MNNG在不同剂量下, 对胃黏膜的影响. 结果发现, 大鼠胃的病理组织学改变, 随着时间的推移, 依次出现浅表性胃炎-慢性胃炎-CAG-CAG伴肠化-癌变, 符合人类PLGC的发展过程[21]. 21世纪初, 世界卫生组织在表述上以IN取代了Dys[22]. 目前临床上将IM和IN统称为PLGC[1]. 由于胃癌病因病机复杂, 较难于疾病早期诊断和治疗. 因此, 作为肠型胃癌预防的重要内容[23,24], PLGC的治疗备受关注[25-30]. 由于MNNG的摄入量的不同, 各组大鼠胃的病理组织学改变也是存在差异的.

总之, MNNG联合模拟人类不健康饮食习惯, 是一种较为理想的PLGC造模方法, 证明了Correa提出的经典假说[6], 与肠型胃癌的演化模式相吻合, 很好的展示了从健康动物到癌前期到胃癌的过程, 为PLGC和胃癌的造模探索了新的方法和思路. MNNG 100 μg/mL自由饮, 联合饥饱失常、高Na饮水、雷尼替丁饲料饮食能提高大鼠成活率、造模的成功率. 高剂量MNNG可提高大鼠癌变率; 低浓度MNNG可以诱导形成鳞状上皮化生; 大剂量MNNG灌胃, 死亡率相对较高. 因此, 应进一步优化MNNG联合多因素的造模方法, 以提高造模成功率.

评论
背景资料

目前, 我国胃癌发病率居全球第2位, 且死亡人数约占全球胃癌死亡总人数的1/4. 由于胃癌本身症状隐匿、特异性低, 不容易于疾病早期被诊断. 因此, 作为胃癌进展中的重要病理学概念和胃癌预防的重要途径, 胃癌前病变(precancerous lesions of gastric cancer, PLGC)的早期诊断尤为重要.

研发前沿

目前胃癌前变的模型基础研究较多, 使用N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine, MNNG)为诱导剂的也较为普遍, 但是, 具体的造模方法目前还没有一个较为统一的标准, 本文主要是使用不同的剂量, 不同的给药途径, 探索最佳的造模方式.

创新盘点

本文在整个实验过程中, 重点探索最适合的给药途径和剂量, 在不同给药途径和剂量下, 大鼠胃黏膜可以发生不同的病变, 比如剂量过大, 有引发鳞癌的发生, 剂量不足的情况下, 大鼠不会发生PLGC, 会使胃壁发生鳞状上皮的改变.

应用要点

本文探索出MNNG不同的给药途径和剂量对SD大鼠胃癌前期病变造模中的胃黏膜组织的病理学影响, 发现MNNG联合饲喂雷尼替丁饲料、饥饱失常、高Na饮水、灌胃, 可诱导出大鼠萎缩、肠化、萎缩伴肠化的模型, 对胃早癌的临床研究有重要的价值.

名词解释

慢性萎缩性胃炎(CAG): 是一种消化系统常见病, 世界卫生组织将其列为胃癌前状态, 是指胃黏膜某些病理学改变较易转变成胃癌;

胃癌前病变(PLGC): 胃癌进展过程中的重要病理学概念, 指胃黏膜某些病理学改变较易转变成胃癌, 包括肠上皮化生和异型增生或上皮内瘤变.

同行评议者

朱永良, 副研究员, 浙江大学医学院附属第二医院

同行评价

本文观察了MNNG不同的给药途径和剂量对SD大鼠胃癌前期病变造模中的胃黏膜组织的病理学影响, 发现MNNG联合饲喂雷尼替丁饲料、饥饱失常、高Na饮水、灌胃, 可诱导出大鼠萎缩、肠化、萎缩伴肠化的模型. 本文结果对研究胃癌前期病变有较大参考价值.

手稿来源: 自由投稿

学科分类: 胃肠病学和肝病学

手稿来源地: 江苏省

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编辑:闫晋利 电编:李瑞芳

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