修回日期: 2014-05-23
接受日期: 2014-06-02
在线出版日期: 2014-07-18
目的: 探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)定植密度与胃黏膜炎症程度及H. pylori定植部位与H. pylori耐药和复发的关系.
方法: 对158例H. pylori阳性胃黏膜非肿瘤性病变活检标本, 应用特殊染色(吉姆萨染色及硼酸亚甲蓝染色)方法检测H. pylori密度; 免疫组织化学染色判定H. pylori在胃黏膜不同深度定植密度; 常规HE染色对胃黏膜炎症程度及活动性程度分级; 分析特殊染色组织中H. pylori密度与炎症程度及活动性程度的关系; 分析免疫组织化学染色组织中H. pylori在黏膜不同深度(黏膜表面、胃小凹、浅层腺体)的定植密度与炎症程度及活动性程度的关系.
结果: H. pylori密度与胃黏膜炎症程度及活动性程度均有相关性, 差异均有统计学意义(P<0.05), H. pylori密度越高中重度胃炎越多, 活动性胃炎比例及程度均增高; 胃黏膜表面、胃小凹及浅层腺体中H. pylori定植密度与胃黏膜炎症程度及活动性程度均有相关性, 差异均有统计学意义(P<0.05), H. pylori在黏膜不同深度的定植密度越高, 中重度慢性胃炎越多, 活动性胃炎的比例及程度也增高.
结论: H. pylori在胃黏膜定植密度与胃黏膜炎症程度有关; H. pylori在胃黏膜层不同深度定植可能与H. pylori耐药和复发有关.
核心提示: 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)可以在胃黏膜层不同深度定植; 定植在胃黏膜层不同深度的H. pylori密度与胃黏膜炎症程度和活动性有相关性; H. pylori可以在胃黏膜层不同深度的定植或许可以解释H. pylori耐药产生及H. pylori相关性胃黏膜疾病治疗后复发的原因.
引文著录: 王莉, 谢会忠, 刘友斌, 符仲标, 杨维忠, 王炳淑, 叶长华, 陈桂妃, 刘昌江. 幽门螺杆菌定植部位和密度对胃黏膜炎症及耐药性的影响. 世界华人消化杂志 2014; 22(20): 2997-3002
Revised: May 23, 2014
Accepted: June 2, 2014
Published online: July 18, 2014
AIM: To analyze the correlation between Helicobacter pylori (H. pylori) colonization density and the severity and activity of gastric mucosal inflammation, to approach the possible reason of drug resistance of H. pylori and H. pylori infection relapse.
METHODS: The H. pylori density in the gastric mucosa was studied in 158 no-neoplasm gastric mucosal biopsy specimens by Giemsa's staining, boracic acid methylene blue staining and immunohistochemical staining, and the severity and activity of gastric mucosal inflammation were evaluated by HE staining. The relationship between H. pylori density and the severity and activity of gastric mucosal inflammation was analyzed. The relationship between the colonization of H. pylori in different parts of the gastric mucosa (gastric mucosal surface, gastric pits, superficial glands) and drug resistance of H. pylori and H. pylori infection relapse was also explored.
RESULTS: H. pylori density was significantly correlated with the severity and activity of gastric mucosal inflammation (P < 0.05), and increased density of H. pylori was associated with more severe and active gastritis (P < 0.05). There was also a significant correlation between H. pylori colonization location and the severity and activity of gastric mucosal inflammation. H. pylori colonization location was associated with drug resistance of H. pylori and H. pylori infection relapse.
CONCLUSION: H. pylori colonization location and density significantly correlate with the severity and activity of gastric mucosal inflammation and drug resistance of H. pylori.
- Citation: Wang L, Xie HZ, Liu YB, Fu ZB, Yang WZ, Wang BS, Ye CH, Chen GF, Liu CJ. Influence of Helicobacter pylori colonization location and density on gastric mucosal inflammation and drug resistance. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2014; 22(20): 2997-3002
- URL: https://www.wjgnet.com/1009-3079/full/v22/i20/2997.htm
- DOI: https://dx.doi.org/10.11569/wcjd.v22.i20.2997
研究表明, 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)感染是慢性胃炎、消化性溃疡发病的相关因素, 甚至与胃癌、胃黏膜相关淋巴组织结外边缘区淋巴瘤(MALT淋巴瘤)的发病亦有关. 临床发现H. pylori感染引起的病变程度轻重不一、治疗后复发率也不一样. 本研究通过病理组织学方法观察H. pylori密度及H. pylori在胃黏膜表面、胃小凹、浅层腺体部位的定植密度与胃黏膜炎症程度及活动性程度的关系, 旨在探讨不同定植部位H. pylori密度与H. pylori相关性胃黏膜炎症的程度、治疗效果的差异, 为临床医生确定H. pylori相关性慢性胃炎及消化性溃疡患者的个体化治疗方案提供理论依据.
收集2012-01-01/2012-12-31在海南省农垦总医院消化内科接受胃镜检查的门诊及住院患者共计577例, 其中胃镜下诊断消化性溃疡190例; 非溃疡性炎性病变218例; 组织病理学诊断胃癌169例. 首先分析190例溃疡标本及218例非溃疡炎性病变标本HE染色切片, 对病变程度(炎症程度及活动性程度)分级, 同时进行H. pylori半定量分析. 然后对H. pylori阳性的158例(溃疡组55例, 非溃疡炎性病变组103例)样本进行特殊染色(吉姆萨染色及硼酸亚甲蓝染色)及免疫组织化学染色, 了解H. pylori的定植密度. 吉姆萨染色试剂购自武汉致诚科技开发公司代理的Baso牌; 硼酸亚甲蓝染色试剂购自福州邁新生物技术开发有限公司; H. pylori免疫组织化学染色试剂购自福州邁新生物技术开发有限公司.
1.2.1 实验过程: 复诊577例病理组织标本HE染色切片, 选取H. pylori阳性非肿瘤性病变158例(溃疡组55例; 非溃疡性炎性病变组103例)进行特殊染色(吉姆萨染色及硼酸亚甲蓝染色)及免疫组织化学染色, 了解H. pylori的定植密度. 吉姆萨染色、硼酸亚甲蓝染色及免疫组织化学染色分别按试剂说明书染色步骤染色. 综合HE染色、吉姆萨染色及硼酸亚甲蓝染色, 对H. pylori密度进行半定量分析; 对H. pylori免疫组织化学染色组织进行黏膜不同深度(黏膜表面、胃小凹、浅层腺体)定植密度分析.
1.2.2 组织病理学观察: 由1位资深病理医师进行炎症程度、活动性程度及H. pylori半定量分析. 低倍镜下(10×10)观察黏膜炎症程度, 分为轻度、中度及重度. 轻度: 炎症细胞较少并局限于黏膜浅层, 不超过黏膜1/3; 中度: 炎症细胞较密集, 超过黏膜层1/3, 但不超过2/3; 重度: 炎症细胞密集, 累及黏膜全层. 高倍镜下(40×10)观察活动性程度, 以黏膜固有层、上皮内嗜中性粒细胞浸润的量分级, 阴性: 无中性粒细胞浸润; 轻度: 黏膜固有层有少数中性粒细胞浸润; 中度: 中性粒细胞较多存在于黏膜层并出现在表面上皮间, 小凹上皮间, 腺管上皮间; 重度: 中性粒细胞较密集, 或除了中度所见外还见小凹脓肿[1,2].
1.2.3 H. pylori阳性结果判定: 高倍镜下(400×)观察黏膜表面、胃小凹及浅层腺腔内的H. pylori分布情况. 镜下见到染色分别呈紫蓝色(HE染色)、紫红色(吉姆萨染色)、蓝色(硼酸亚甲蓝染色)及棕黄色(免疫组织化学染色)的逗点状或短棒状小体为H. pylori阳性. 采用修订后的悉尼标准进行H. pylori半定量诊断. H. pylori密度定为+-+++级, "+"为偶见或小于标本全长1/3有少量H. pylori; "++"为H. pylori分布超过全长1/3, 未在标本全长2/3或似连续性, 稀疏地存在于上皮表面; "+++"为H. pylori成堆存在, 分布于标本全长.
统计学处理 采用SPSS17.0统计软件统计分析, 配对设计双向有序资料的χ2检验, P<0.05为差异有统计学意义.
H. pylori密度与胃黏膜炎症程度有相关性, 差异有统计学意义(P<0.05)(表1), H. pylori密度越高中重度胃炎明显增多.
| 胃黏膜炎症程度 | H. pylori(+) | H. pylori(++) | H. pylori(+++) |
| 轻度慢性胃炎 | 8 | 2 | 0 |
| 中度慢性胃炎 | 26 | 26 | 52 |
| 重度慢性胃炎 | 7 | 10 | 27 |
H. pylori密度与胃黏膜炎症活动性有相关性, 差异有统计学意义(P<0.05)(表2), H. pylori密度越高, 活动性胃炎比例及程度均增高.
| 胃黏膜炎症活动性程度 | H. pylori(+) | H. pylori(++) | H. pylori(+++) |
| 静止性胃炎 | 6 | 0 | 1 |
| 轻度慢性活动性胃炎 | 20 | 15 | 18 |
| 中度慢性活动性胃炎 | 11 | 17 | 33 |
| 重度慢性活动性胃炎 | 3 | 7 | 27 |
胃黏膜表面、胃小凹及浅层腺体的H. pylori定植密度与胃黏膜炎症程度有相关性, 差异有统计学意义(P<0.05), H. pylori在黏膜不同深度的定植密度越高, 中重度胃炎越多(表3, 图1).
胃黏膜表面、胃小凹及浅层腺体的H. pylori定植密度与胃黏膜炎症活动性程度有相关性, 差异有统计学意义(P<0.05), H. pylori在黏膜不同深度的定植密度越高, 活动性胃炎的比例及程度均增高(表4).
相对于其他H. pylori检测方法, 胃黏膜活检组织H. pylori检测的优势在于可以定位及密度比较. 通过对活检组织中H. pylori定植密度差异与炎症程度、活动性程度分析, 可以较为准确的评估二者之间的关系.
HE染色较其他几种方法的优点在于, 无需加做其他染色, 在观察病变程度的同时对H. pylori进行半定量分析, 但因H. pylori显色较淡, 不易观察, 容易漏诊. 江南等[3]认为吉姆萨法检测敏感性优于硼酸美蓝法, 杨江辉等[4]认为硼酸美蓝法与吉姆萨法染色结果相似, 但前者操作简单耗时短. 本研究显示吉姆萨染色H. pylori显色清晰容易被检出, 但背景着色较深, 易与胃小凹和腺腔内的杂质混淆. 硼酸亚甲蓝染色较吉姆萨染色方法简单且时间短, 检出结果近似. 免疫组织化学染色H. pylori显色结果清晰, 背景不着色易于分辨, 尤其是对于胃小凹、腺腔内的细菌定位准确, 但该染色方法费用较高且耗时相对较长, 我们认为硼酸亚甲蓝染色因操作简便, 耗时短, 费用低廉, 易于大范围普查H. pylori感染. 针对免疫组织化学染色法对H. pylori特异性显色的特点, 可用于分析H. pylori在胃黏膜不同部位的定植情况.
卜建朝等[5]调查显示H. pylori是慢性胃炎、消化性溃疡的主要病因, 与胃癌的发生密切相关. 初步统计, 全世界超过50%的人群有H. pylori感染, 其中西方国家的感染率为25%-50%, 发展中国家有的高达80%. 查健忠等[6]研究表明H. pylori感染与胃黏膜炎症程度、活动性程度等密切相关. 马应杰等[7]认为不同H. pylori定植密度与胃窦黏膜慢性炎症程度有所不同, 但差异无显著性, 原因可能是: (1)H. pylori是基因多态性较强的细菌, 不同基因型H. pylori其致病性不同, 若胃黏膜感染的H. pylori是高毒力株, 其损害黏膜程度较同样数量低毒力株明显; (2)H. pylori相关性慢性胃炎, H. pylori感染虽是主要病因, 但胃酸及黏液分泌异常亦在黏膜炎症的发展中起重要作用, 同样数量的H. pylori感染, 炎症程度可因胃酸和黏液分泌异常程度不同而不同, 本研究结果表明胃黏膜炎症程度及活动性程度与H. pylori定植密度有关, 随着H. pylori密度的增加, 胃黏膜炎症程度及活动性程度逐渐加重, 支持H. pylori感染是胃黏膜炎症发病的重要相关因素, 而且H. pylori密度与炎症程度正相关, 密度越大炎症程度越重.
H. pylori感染是慢性胃炎最主要的发病因素. H. pylori通过多方面作用引起慢性胃炎: (1)H. pylori通过鞭毛穿过黏液层到达胃黏膜, 再通过黏附素结合于上皮细胞, 由此定居于胃窦黏膜小凹处及其邻近上皮细胞; (2)H. pylori产生空泡毒素蛋白, 损伤上皮细胞; (3)H. pylori分解尿素产生尿素氮, 后者在保持细菌周围中性环境的同时还可以损伤上皮细胞; (4)H. pylori产生细胞毒素相关基因蛋白, 产生剧烈的炎症反应; (5)H. pylori菌体细胞壁可以作为抗原诱发免疫反应[8]. 柳云恩等[9]研究发现H. pylori可以定植在胃小凹上皮细胞表面且大量游离于表面黏液内, 从浅表性胃炎-萎缩性胃炎-胃癌过程中, 胃黏液内游离的H. pylori密度逐渐升高, 表明胃黏液内游离H. pylori参与了对胃黏膜的损伤过程. 本研究通过免疫组织化学染色方法观察H. pylori在胃黏膜层不同深度的H. pylori定植分布, 在中度及重度慢性胃炎, 黏膜表面、胃小凹及黏膜固有层浅层腺体中H. pylori密度随着炎症程度及活动性程度的加重而递增, 说明胃黏膜炎症程度与胃黏膜不同深度H. pylori定植密度有关, 随着黏膜较深部位H. pylori定植密度增加, 炎症程度及活动性程度亦加重.
临床抗H. pylori治疗慢性胃炎和消化性溃疡常出现治疗后复发或耐药现象. H. pylori根除失败原因很多, 可归纳为菌株因素、宿主因素和环境因素[10], 其中菌株因素包括H. pylori球形变、毒力因子和基因型、H. pylori定植部位与密度及混合感染[11]. H. pylori定植部位与密度影响根除效率, 通常认为定植于细胞内及胃窦胃体交界处的H. pylori不易根除[12]. 胃内定植菌量多时, 巨大的细菌负荷会产生接种物效应, 使H. pylori黏附于胃黏膜细胞, 形成一层具有保护作用的生物被膜, 隔断细菌与抗生素接触, 导致治疗失败. 进入黏液细胞内的H. pylori对抗生素的敏感性降低则更容易导致H. pylori根除治疗的失败. 有研究资料表明进人胃黏膜上皮空泡内的H. pylori存活的半衰期约24 h, 而且还有可能返回到细胞外重新定植[13]. 有研究发现H. pylori根除治疗成功的患者, 每年有3%-9%的患者快速尿素酶试验或尿素呼气试验再转为阳性, 提示H. pylori感染的复发或再感染. 因H. pylori再次转为阳性的发生率在根除后第1年最高, 提示多为原感染菌株的复发, 而不是新菌株的再感染[14]. 针对复发多发于根除后第1年, 有人建议对抗H. pylori治疗多次失败者, 间隔3-6 mo之后, 让H. pylori恢复其活性, 之后再进行H. pylori根除治疗, 以便提高H. pylori根除率[15]. 以上研究均表明H. pylori定植部位和密度在慢性胃炎和消化性溃疡治疗后复发中起重要作用. 本研究结果显示H. pylori定植部位越深导致的炎症反应越重, 可能与H. pylori定植部位较深, 抗生素不易穿透黏液层作用于较深部位的H. pylori, 导致较深部位H. pylori持续不断地引起致炎作用有关, 同时定植较深部位的H. pylori受抗生素的作用小, 相当于小剂量持续刺激易导致耐药. H. pylori定植部位因素或许可以解释胃黏膜慢性炎症或溃疡迁延不愈或停药后复发的原因. 提示黏膜深部H. pylori的定植生长对胃黏膜炎症的进展及转归有影响.
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)感染与胃黏膜病变有相关性, H. pylori引起胃黏膜病变程度轻重不一且治疗后复发率也不一样, 尤其是H. pylori耐药性的产生亦成为临床关注热点. 研究H. pylori在胃黏膜层不同深度的定植与胃黏膜病变的关系, 或许可以从H. pylori的定植深度解释其产生耐药性的机制.
谭周进, 教授, 湖南中医药大学
H. pylori可以定植在胃黏膜上皮表面, 分泌空泡毒素等诱导胃黏膜产生细胞因子直接损伤胃黏膜, 引起炎症或溃疡等病变. H. pylori定植密度与胃黏膜病变的严重程度和活动性有相关性. H. pylori在胃黏膜不同深度的定植与耐药性的相关性是亟待研究的热点之一.
徐存美等比较了H. pylori对4种抗生素的耐药率, 认为H. pylori产生耐药性与不同定植部位有关系, 后者使H. pylori逃脱抗生素的打击而产生耐药, 并且H. pylori定植密度与其根除效果有相关性, 过多的H. pylori可产生接种物效应, 在胃黏膜细胞形成一层生物膜使H. pylori不与抗生素接触而导致治疗失败.
本研究表明H. pylori感染密度与胃黏膜炎症程度及活动性有相关性; 通过H. pylori可以定植在胃黏膜不同深度(黏膜表面、胃小凹及浅层腺体)的观察, 可以解释H. pylori耐药性或许与抗生素不易透过黏液层作用于深部位的H. pylori有关系.
本研究表明H. pylori可以定植在胃黏膜层不同深度并且定植部位的深度与黏膜病变的严重性有相关性.基于此点, 部分H. pylori相关性胃黏膜病变迁延不愈或停药后易于复发的原因或许与抗生素不易穿透黏液层作用于较深部位的H. pylori有关系. 临床抗H. pylori治疗需考虑H. pylori定植的不同深度提出不同的个体化治疗方案.
本文表明H. pylori可在胃黏膜层不同深度定植并且不同深度的H. pylori密度与胃黏膜炎症程度和活动性有相关性. 结果提示H. pylori在胃黏膜层不同深度的定植或许可以解释H. pylori耐药产生及停药后H. pylori复发的原因, 为临床拟定抗H. pylori治疗需考虑个体化方案提供了理论依据.
编辑 郭鹏 电编 都珍珍
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