修回日期: 2014-03-27
接受日期: 2014-03-28
在线出版日期: 2014-04-28
目的: 探讨检测血清可溶性髓样细胞触发受体-1(soluble triggering receptor expressed on myeloid cell 1, sTREM-1)和CD64表达水平在新生儿腹泻早期诊断和疗效判断中的价值.
方法: 将69例患儿按腹泻的类型分为细菌性腹泻组、病毒性腹泻组和非感染性腹泻组, 采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清sTREM-1浓度, 采用流式细胞技术测定中性粒细胞表面分子CD64的表达, 应用受试工作特征曲线(receiver operator characteristic curve, ROC)研究sTREM-1、CD64的诊断效能, 并比较每位患儿治疗前后的两指标变化情况.
结果: 细菌性腹泻组、病毒性腹泻组与非感染腹泻组血清sTREM-1中位数水平分别为75.25、23.25和15.25 pg/mL, 三组间比较差异有统计学意义(P<0.05); 细菌性腹泻组CD64阳性百分率中位数为69.36 MFI, 高于病毒性腹泻组和非感染腹泻组(分别为25.50、21.37 MFI), 三组间比较差异有统计学意义(P<0.05). 治疗后sTREM-1和CRP明显较治疗前下降(P<0.05), 病毒性腹泻组与非感染性腹泻组的sTREM-1和CD64比较差异无统计学意义(P>0.05). sTREM-1诊断细菌性腹泻的敏感性90%, 特异度82%. CD64诊断细菌性腹泻的敏感度为88%, 特异度为93%.
结论: sTREM-1、CD64测定有助于细菌性腹泻的早期诊断、鉴别诊断和对抗菌药物疗效的判断.
核心提示: 本研究数据ROC曲线显示, CD64的特异性优于血清可溶性髓系细胞触发受体-1(soluble triggering receptor expressed on myeloid cell 1, sTREM-1), 而sTREM-1敏感性则比CD64强, 因此联合检测CD64和sTREM-1更能为鉴别腹泻的类型提供可靠的依据. 相对而言, CD64具有更好的预测值, 其诊断小儿腹泻的结果较sTREM-1更为可靠.
引文著录: 杨芳, 涂芳芳, 项文娜, 曾绮丹. sTREM-1和CD64指数测定在诊断新生儿腹泻中的临床意义. 世界华人消化杂志 2014; 22(12): 1756-1759
Revised: March 27, 2014
Accepted: March 28, 2014
Published online: April 28, 2014
AIM: To assess the significance of serum soluble triggering receptor expressed on myeloid cell-1 (sTREM-1) and neutrophil CD64 in the differential diagnosis and therapeutic evaluation of neonatal diarrhea.
METHODS: This was a prospective observational study. Ninety patients were divided into a bacterial diarrhea group (n = 32), a viral diarrhea group (n = 32), and a non-infection diarrhea group (n = 32). Serum sTREM-1 was measured by double-antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). CD64 was measured by automatic flow cytometry. Serum sTREM-1 and CD64 were detected in each child before and after treatment. The diagnostic value of sTREM-1 and CD64 was assessed by receiver operating characteristic (ROC) curve analysis.
RESULTS: Median concentrations of serum sTREM-1 and CD64 in the bacterial, viral infection and non-infection groups were 75.25, 23.25 and 15.25 pg/mL, and 69.36, 25.50 and 21.37 MFI, respectively. After treatment, the level of sTREM-1 in the bacterial diarrhea group was significantly higher than those in the viral diarrhea and non-infection groups (P < 0.05), although there was no statistical difference between the viral diarrhea group and non-infectious diarrhea group (P > 0.05). The sensitivity and specificity of serum sTREM-1 for diagnosis of neonatal diarrhea were 90% and 82%, respectively, while those of serum CD64 were 88% and 93%.
CONCLUSION: Serum sTREM-1 and CD64 detection can be used for early diagnosis and differential diagnosis of bacterial diarrhea and for observation of anti-infection effects.
- Citation: Yang F, Tu FF, Xiang WN, Zeng QD. Clinical significance of serum soluble triggering receptor expressed on myeloid cell-1 and neutrophil CD64 in neonatal diarrhea. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2014; 22(12): 1756-1759
- URL: https://www.wjgnet.com/1009-3079/full/v22/i12/1756.htm
- DOI: https://dx.doi.org/10.11569/wcjd.v22.i12.1756
感染性腹泻又称肠炎, 对新生儿健康危害甚大, 由于新生儿免疫系统发育不完善, 并且由胎儿的无菌环境到出生后立即暴露在各种细菌存在的环境中, 使新生儿易患感染性腹泻, 目前对早期诊断新生儿细菌性感染的生物学指标仍存有争议[1]. 我们通过对外周血中血清可溶性髓系细胞触发受体-1(soluble triggering receptor expressed on myeloid cell 1, sTREM-1)及中性粒细胞表面分子CD64的检测分析, 探讨上述两种指标用来鉴别小儿腹泻类型和疗效判断的价值.
选择2011-08/2012-06温州医科大学附属第三医院儿童医院住院新生儿69例, 男37例, 女32例; 早产儿18例, 足月儿51例. 将患儿按相关疾病诊断标准分为三组: 细菌性腹泻组、病毒性腹泻组和非感染性腹泻组, 每组23例. 三组患儿胎龄、体质量、入院日龄等比较差异均无统计学意义(P>0.05)(表1).
| 细菌组 | 病毒组 | 非感染组 | F值 | P值 | |
| 胎龄(wk) | 39.2±1.6 | 39.3±1.5 | 38.4±2.3 | 0.45 | >0.05 |
| 体质量(g) | 3215.6±586.2 | 3191.6±593.7 | 3392.9±626.3 | 0.53 | >0.05 |
| 入院日龄(d) | 18.2±6.7 | 17.4±5.8 | 16.6±6.1 | 0.29 | >0.05 |
1.2.1 血清sTREM-1测定: 取3 mL置于促凝集生化管, 离心后取血清保存于-20 ℃, 用于血清sTREM-1水平测定. 血清sTREM-1测定采用双抗体夹心酶联免疫吸附法, 操作严格按照sTREM-1检测试剂盒(上海沪峰生物科技有限公司)中使用说明进行.
1.2.2 CD64检测: 50 μL全血加CD64-FITC抗体20 μL(美国BD公司产品)混匀, 以IgGI-FITC为同型对照. 暗处放置30 min后加流式细胞分析(FACS)溶血剂2 mL, 暗处放置15 min后用流式细胞仪(美国BD公司FACS Calibur)检测, 根据FSC/SSC点图显示的形态学特征选定中性粒细胞群, 每个样本计数1万个细胞, 测定CD64的平均荧光强度(MFI).
统计学处理 应用SPSS18.0统计软件包进行统计学处理, 对于满足正态分布的计量资料用mean±SD表示, 采用方差分析方法, 对于不满足正态分布的计量资料以中位数表示并采用非参数检验. 绘制受试者工作特征曲线(receiver operator characteristic curve, ROC)比较sTREM-1与CD64的AUC面积, AUC面积比较采用Z检验. P<0.05为差异有统计学意义.
此2项指标在细菌性腹泻组中表达高于病毒性腹泻组和非感染腹泻组, 三组间差异有统计学意义. 三组sTREM-1中位数分别为75.25、23.25、15.25 pg/mL; 中性粒细胞表面CD64分别为69.36、25.50、21.37 MFI(表2, 3).
以本组资料通过SPSS18.0软件绘制ROC曲线, 计算得出阳性标准为sTREM-1>24.45 pg/mL, 其敏感性为90%, 特异性为82%; CD64>35 MFI, 其敏感性为88%, 特异性为93%.
腹泻病是一组临床常见病, 多发病. 其主要临床表现是大便次数多以及性状的改变. 腹泻病由多病原引起, 严重时可出现脱水以及电解质的紊乱, 小儿腹泻病的发病率高, 危害极性大, 可以造成小儿营养不良和生长发育障碍, 严重时甚至出现死亡[2], 小儿腹泻病的严重性足以引起医务工作人员的重视.
TREM又称髓样细胞触发受体, 是一种表达于髓样细胞的免疫球蛋白超家族, 其中成员TREM-1在炎性反应的发生发展中起重要作用[3]. 伴随TREM-1在炎性反应中表达增高, 可溶形式的TREM-1(sTREM-1)也随之增多, 后者可能是由于蛋白水解作用从膜上脱落的、缺乏跨膜域及胞内域的一种形式. 虽然有关sTREM-1的确切来源尚未证实, 但在感染早期sTREM-1即可释放入体液且表达上调[4]. 中性粒细胞和单核细胞可受TREM-1诱导分泌肿瘤坏死因子-a、白介素-1B、干扰素-g等促炎细胞因子, 中性粒细胞还可释放髓过氧化酶. Trem-1在细胞内部可诱发钙离子转移,使细胞表面信号相关激酶和磷脂酶C络氨酸磷酸化, 增强或放大炎性反应,使其发生过度炎性反应[5]. 在脓毒症诊断研究中, sTREM-1相对于C反应蛋白和前降钙素更具有敏感性和特异性[6]. 在另一项研究中表明[7], sTREM-1在全身炎症反应综合征与感染的鉴别中同样有高的敏感性和特异性, 当临界值选取230 pg/mL时sTREM-1的敏感性达96%, 特异性达91%. 在本实验中, 细菌性腹泻组较病毒性腹泻组及非感染腹泻组间血浆sTREM-1水平显著升高. 同时, 在选取临界值为24.45 pg/mL时, 其敏感性和特异性分别为90%和82%. 虽然该结果低于上述文献报道, 这可能与实验方法及截断值取值不同有关, 但却印证了细菌性腹泻时sTREM-1水平是显著升高的, 并与病毒性腹泻组及非感染组相比差异有统计学意义.
CD64在外周血中主要分布于单核细胞、巨噬细胞及树突细胞表面, 而在中性粒细胞表面低水平表达, 当受到细菌脂多糖和粒细胞集落刺激因子、干扰素-1等因子刺激时, 可使CD64在中性粒细胞表面大量表达[8], 是中性粒细胞产生吞噬的早期信号. 中性粒细胞活化时表达CD64, 已被作为区分感染和诊断败血症的有效指标. Zeitoun等[9]研究表明, CD64在诊断新生儿脓毒症时, 敏感性达92%, 一项Meta分析表明[10], 在细菌感染时CD64诊断敏感性、特异性、阳性似然比、阴性似然比和ROC曲线下面积分别为76%、85%、6.67%、0.24%、0.92%. Pauksens等[11]认为细菌性感染者外周血中性粒细胞CD64的表带增加, 在细菌性感染中具有较高的特异性, 有助于早期诊断细菌感染和判断感染的程度. Allen等[12]认为非细菌感染CD64没有高表达. 国内报道CD64表达在革兰阳性菌和阴性菌间无差异, 且表达时间相对较早(4-6 h即出现), 是中性粒细胞产生吞噬和杀菌的早期信号[13], 在细菌性感染中具有很高的特异性, 有助于早期诊断细菌感染和判断感染的程度[14]. 本研究结果表明细菌性腹泻组CD64的表带量明显高于病毒性腹泻组和非感染腹泻组(P<0.05). 而病毒性腹泻组和非感染腹泻组的CD64表达量差异无统计学意义, 表明CD64是一种敏感的细菌感染标志物, 在细菌感染的早期CD64水平即可升高, 特别是全身性重症细菌感染时升高尤为明显, 因而中性粒细胞CD64的表达量可作为鉴别细菌性腹泻与非细菌性腹泻的重要依据之一, 作为新生儿细菌感染的早期检测指标, 决定是否使用抗生素. Richeldi等[15]研究表明, 单核细胞TREM-1的激活参与了反应微生物攻击、宿主防御的早期诱导和适应性免疫反应. TREM-1的表达无法加强其自身免疫性疾病, 但可以对炎性因子的合成过程进行激发. 在炎症发生发展的过程中, 促炎细胞因子和抗炎细胞因子之间发生相互作用, 对感染转归的结果形成影响[16]. 细菌性腹泻经抗菌药物治疗后CD64和sTREM-1的表达量明显下降, 与治疗前相比较差异有统计学意义(P<0.05), 可作为疗效判断的指标之一.
本研究数据ROC曲线显示, CD64的特异性优于sTREM-1, 而sTREM-1敏感性则比CD64强, 因此联合检测CD64和sTREM-1更能为鉴别腹泻的类型提供可靠的依据. 相对而言, CD64具有更好的预测值, 其诊断小儿腹泻的结果较sTREM-1更为可靠. 但是中性粒细胞CD64在一部分自身免疫性疾病中呈高表达, 对于单独测定外周血中性粒细胞CD64鉴别细菌感染和自身免疫性疾病存在争议. 联合sTREM-1测定在一定程度上减少中性粒细胞CD64诊断感染作用的局限性, 联合检测能互为补充, 提高感染性疾病的检出率, 提高诊断效率, 降低漏诊率.
总之, 中性粒细胞CD64和可溶形式的TREM-1在早期诊断小儿腹泻有很高的临床价值, 两者联合检测更具意义. 但是, 由于本实验纳入患者样本量偏小, 对于sTREM-1和CD64在不同程度感染的小腹泻患者中表达差异, 有待大样本、多中心研究进一步证实. 此外, 上述生物学指标必须与临床紧密联系, 在临床表现的基础上发挥其辅助诊断价值, 才能提高对感染性疾病的早期诊断和鉴别诊断.
腹泻病是一组临床常见病, 多发病 其主要临床表现是大便次数多以及性状的改变. 腹泻病由多病原引起, 严重时可出现脱水以及电解质的紊乱, 小儿腹泻病的发病率高, 危害极性大, 可以造成小儿营养不良和生长发育障碍, 严重时甚至出现死亡, 小儿腹泻病的严重性足以引起医务工作人员的重视. 本研究通过对外周血中血清可溶性髓系细胞触发受体-1(soluble triggering receptor expressed on myeloid cell 1, sTREM-1)及中性粒细胞表面分子CD64的检测分析, 探讨上述两种指标用来鉴别小儿腹泻类型和疗效判断的价值.
陈志辉, 副主任医师, 中国人民解放军第二军医大学附属长海医院感染科
中性粒细胞CD64在一部分自身免疫性疾病中呈高表达, 对于单独测定外周血中性粒细胞CD64鉴别细菌感染和自身免疫性疾病存在争议.
Richeldi等研究表明, 单核细胞TREM-1的激活参与了微生物攻击、宿主防御的早期诱导和适应性免疫反应.
由于本实验纳入患者样本量偏小, 对于sTREM-1和CD64在不同程度感染的小腹泻患者中表达差异, 有待大样本、多中心研究进一步证实. 此外, 上述生物学指标必须与临床紧密联系, 在临床表现的基础上发挥其辅助诊断价值, 才能提高对感染性疾病的早期诊断和鉴别诊断.
中性粒细胞CD64和可溶形式的TREM-1在早期诊断小儿腹泻有很高的临床价值, 两者联合检测更具意义.
本文设计合理, 结果可靠, 对临床有一定参考价值.
编辑:田滢 电编:鲁亚静
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