ELISA法与Hp SA免疫快检卡检测幽门螺杆菌粪便抗原的比较

摘要

目的: 比较ELISA法(enzyme immunoassay)与Hp SA免疫快检卡(immuno Card STAT Hp SA)检测幽门螺杆菌粪便抗原(Hp SA)的准确性和可靠性.

方法: 以¹⁴C呼吸试验和快速尿素酶(rapid urease test, RUT)阳性为"金标准", ELISA法和HpSA免疫快检卡检测HpSA阳性率和阴性率分别与"金标准"进行比较.

结果: 与"金标准"相比, ELISA法敏感性为83.3%(5/6), 特异性为88.3%(30/34); Hp SA免疫快检卡的敏感性为 92.3%(12/13), 特异性为92.6%(25/27).

结论: 无论是Hp SA免疫快检卡还是ELISA法检测Hp SA, 都具备良好的敏感性和特异性.

关键词: N/A

N/A

N/A

Correspondence to: N/A

Received: November 13, 2003
Revised: December 4, 2003
Accepted: December 16, 2003
Published online: May 15, 2004

Abstract

N/A

Key Words: N/A

0 引言

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)非侵入性检查因其无痛苦、便捷等优势越来越为临床医生及患者接受成为检测Hp的主要方法[1]. 目前临床Hp非侵入性检查常用方法包括Hp血清抗体检测、¹³C或¹⁴C呼气试验、幽门螺杆菌粪便抗原(Hp SA)检测等. 其中¹³C、¹⁴C呼气试验准确可靠, 其与诊断Hp感染的"金标准", 组织学检查、RUT和细菌分离培养的准确性和可靠性相似[1-5], 但是¹³C呼气试验价格昂贵, ¹⁴C存在一定放射性[6]; Hp血清抗体检测不能证实是否存在Hp现症感染, 因此, 其应用受到一定限制.Hp SA检测安全性高、可操作性强, 比上述两种方法更易推广普及. 本研究对比了ELISA法与Hp SA免疫快检卡检测Hp SA的准确性和可靠性, 旨在评价两种方法的临床价值.

1 材料和方法

1.1材料

2003-03/2003-08月在我院消化科住院患者80例, 19-72岁, 男56例, 女24例, 不考虑检查前是否服用过抗生素、铋剂或质子泵抑制剂, 随机分为两组. 一组为Hp SA免疫快检卡法; 一组为ELISA法, 每组40例. 所有病例常规¹⁴C呼吸试验和胃镜检查并留取组织行RUT检查证实是否存在Hp感染并以此为"金标准", 同时留取大便标本. Hp SA免疫快检卡法组留取的大便标本立即测定幽门螺杆菌抗原, ELISA法组留取大便标本在-70 ℃保存, 直至测定Hp Ag.

1.2方法

采用北京九强公司提供的美鼎生物有限公司(Meridian Bioscience, Inc)幽门螺杆菌检测酶联免疫试剂盒及Hp SA免疫快检卡(immunocard stat Hp SA)进行试验. (1)操作步骤: 留取患者胃镜检查、¹⁴C呼气试验当日或次日早晨的粪便. (2)Hp SA免疫快检卡法检测用试剂盒自带的涂抹棒移取直径在5-6 mm的粪便标本至稀释液, 震荡15 s; 滴加4滴标本稀释液到试剂卡一端的圆孔, 5 min后读取结果; 阳性、阴性判断结果参照试剂盒说明书. (3)ELISA法检测: 取直径约5-6 mm充分混匀的粪便标本, 置入12 mm×75 mm试管, 加入50 uL样本稀释液, 充分混匀, 振荡15 s. 在抗体包被的微孔板固定好微孔并标记固定, 在各微孔中加入50 uL已经稀释的粪便, 设阳性和阴性对照各一孔. 随后加入酶结合物, 振荡30 s, 用微孔条密封器封严, 22-27 ℃孵育1 h. 洗板4次, 加入两滴底物溶液, 振荡30 s, 22-27 ℃孵育10 min, 加入一滴终止液振荡30 s后在Bio Rad Model 550型酶标仪450/630 nm测定吸光光度值, 按试剂盒标准判定结果.

2 结果

2.1 Hp SA免疫快检卡检测粪便Hp SA与¹⁴C呼气试验和RUT阳性率比较

根据Hp检测"金标准"(即¹⁴C呼气试验和RUT阳性者)诊断阳性病例13例, 阴性病例27例. Hp SA免疫快检卡检测Hp SA阳性14例, 阴性26例, 与"金标准"比较, Hp SA免疫快检卡检测粪便Hp SA的敏感性为 92.3%(12/13), 特异性为92.6%(25/27); 其阳性预测值为85.7%(12/14); 阴性预测值为96.2%(25/26), 其准确度为92.5%(37/40). "金标准"的阳性率为32.5%(13/40); Hp SA免疫快检卡的阳性率为35.0%(14/40), 二者阳性率比较无显著性差异(P>0.05)(表1).

表1 40例患者粪便抗原免疫快检卡检测结果.

方法	Hp"金标准"检测		合计
	阳性	阴性
免疫快检卡检测阳性	12	2	14
免疫快检卡检测阴性	1	25	26
合计	13	27	40

ELISA法检测Hp SA与¹⁴C呼吸试验和RUT阳性率比较"金标准"阳性病例及阴性病例选择参照上述方法. ELISA法检测Hp SA阳性病例9例, 阴性病例31例, 与"金标准"比较, ELISA法检测Hp SA的敏感性为83.3%(5/6), 特异性为88.3%(30/34); 其阳性预测值为55.6%(5/9); 阴性预测值为96.8%(30/31), 其准确度为87.5%(35/40)."金标准"的阳性率为15.0%(6/40); Hp SA免疫快检卡的阳性率为22.5% (9/40). 二者阳性率比较无显著性差异(P>0.05)(表2).

表2 40例患者粪便抗原ELISA法检测结果.

方法	Hp"金标准"检测		合计
	阳性	阴性
ELISA法阳性	5	4	9
ELISA法阴性	1	30	31
合计	6	34	40

3 讨论

Hp感染的实验诊断包括侵袭性和非侵袭性两类, 前者包括胃镜检查取活检组织标本作切片染色、细菌分离培养和RUT, 这三项检查认为是Hp感染的"金标准". 此外活检组织PCR扩增法[6-8]. 这类方法带有创伤性, 尤其不适合孕妇、老人、儿童, 且其结果受Hp感染灶在胃黏膜分布不均匀的影响, 易造成假阳性; 后者包括Hp血清抗体检测、¹³C或¹⁴C呼气试验、Hp SA检测等[6]. 近年来随着¹³C或¹⁴C呼气试验广泛开展, 已经证实呼气试验与"金标准"之间特异性及敏感性相似, 因此近来亦有研究将¹³C或¹⁴C呼气试验作为"金标准". 粪便HpSA检测的方法首先见于1997年美国胃肠病周会议报道, 1999年Chang et al首先报道粪便中存在幽门螺杆菌特异性抗原成分, 并认为检测Hp SA是一种简便、精确、无创的诊断方法[1,9-15]. Hp SA免疫快检卡检测Hp其阳性率与"金标准"无显著差异, 但是ELISA法阳性率较"金标准"增高. 我们认为这可能两种方法选用的Hp抗体有关, 前者为Hp特异性单克隆抗体, 而后者为多克隆抗体, 因此, ELISA法更宜出现假阳性结果[9-10]. 这也提示ELISA法更易用于Hp的筛选, 而Hp SA免疫快检卡则更易应用于Hp根除后的检测. 无论是Hp SA免疫快检卡还是ELISA法检测Hp SA, 都具备良好的敏感性和特异性. 与已有文献报道的敏感度和特异性相似. 两种方法之间比较, 其特异性和敏感性无显著性差异. 本研究中两种方法的阳性预测值偏低, 阴性预测值偏高, 考虑与所选择病例为几经就医患者, 院外多数服用过PPI、铋剂或抗生素导致Hp的感染率太低有关. 但是就两种方法比较而言, ELISA法的阳性预测值明显低于Hp SA免疫快检卡法, 一定程度上说明Hp SA免疫快检卡法对辅助诊断Hp感染和治疗监测有更好的临床价值. 但是, ELISA法价格相对便宜, 材料更加节省, 更有利于在相对贫困地区普及. 总之, 这两种方法操作简单, 标本来源方便, 特别适合于儿童、孕妇、老年人等不宜行胃镜检查的患者. 因此, ELISA法和HpSA免疫快检卡法值得临床推广应用.

备注

$[Footnotes]

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