慢病毒-HBx表达载体的构建及其在人正常肝细胞系Chang liver的稳定表达

图1 从pcDNA3. 1-HBx质粒中用PCR扩增得到的HBx基因和酶切鉴定. A: 从质粒pcDNA3.1-HBx中扩增HBx基因. 1: Marker DL2000; 2: HBx的PCR产物(箭头显示HBx的PCR产物的DNA位置). B:重组慢病毒载体的酶切鉴定. 1: Marker DL15000; 2: 酶切产物. HBx基因: 乙型肝炎病毒X基因.

图2 重组载体部分测序图及BLAST比对结果. A: 重组载体的HBx测序图(部分); B: 基因库中的HBx序列与测序结果进行BLAST比对. HBx: 乙型肝炎病毒X.

图3 慢病毒感染的Chang liver细胞. A: 感染慢病毒96 h可见光下观察细胞; B: 感染慢病毒96 h荧光下观察细胞(×200); C: 加入嘌呤霉素24 h可见光下观察细胞; D: 加入嘌呤霉素24 h荧光下观察细胞(×200); E: 嘌呤霉素筛选的第14 d可见光下观察细胞; F: 嘌呤霉素筛选的第14 d荧光下观察细胞(×200).

图4 免疫荧光法鉴定细胞株Chang liver-HBx中HBx的表达. A: 野生型Chang liver细胞; B: 转染空载体的Chang liver细胞; C: Chang liver-HBx细胞. HBx: 乙型肝炎病毒X.

图5 Western blot鉴定细胞株Chang liver-HBx中HBx蛋白的表达. 1:野生型Chang liver细胞总蛋白; 2: 细胞Chang liver-EGFP筛选后培养2 mo后的总蛋白; 3: Chang liver-HBx细胞筛选第14天的总蛋白; 4: Chang liver-HBx细胞筛选后培养2 mo后的总蛋白. HBx蛋白: 乙型肝炎病毒X蛋白.