人突变型CDK4真核荧光表达质粒的构建及对人肝细胞SMMC-7702中POLD1基因表达的调控

图1 重组质粒GFP-CDK4酶切和PCR产物电泳. 1: GFP-CDK4质粒SalⅠ单酶切产物; 2: GFP-CDK4质粒EcoRⅠ单酶切产物; 3: GFP-CDK4质粒SalⅠ/EcoRⅠ双酶切产物; 4: CDK4和β-actin PCR产物. 1, 2: 泳道显示GFP-CDK4质粒单酶切后的线性质粒位于4 000-7 000 bp之间, 符合预计长度5 708 bp; 3: 泳道显示双酶切产物为两根条带GFP(4 731 bp)和CDK4(977 bp); 4: 泳道同时显示CDK4和β-actin(247 bp)PCR扩增产物.

图2 GFP-CDK4序列碱基突变位点比对示意图. A: 突变密集区(516-524 bp); B: 突变密集区(605-633 bp).

图3 SMMC-7702细胞生长曲线图.

图4 SMMC-7702瞬时转染GFP-CDK4后绿色荧光照片. A: 转染后24 h; B: 转染后48 h; C: 转染后72 h; D: 转染后96 h.

图5 荧光定量测定CDK4/POLD1 mRNA 表达水平. 以SMMC-7702细胞组为对照, 转染后48 h检测实验组CDK4/POLD1明显高于阴性对照组pEGFP-C1和空白对照组lipo2000(P<0.01).

图6 Western blot检测CDK4/P125蛋白表达量. 稳转GFP-CDK4的SMMC-7702细胞CDK4/P125蛋白灰度值均高于对照组SMMC-7702和阴性对照组pEGFP-C1(P<0.05).