基础研究
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世界华人消化杂志. 2022-05-08; 30(9): 393-401
Published online 2022-05-08. doi: 10.11569/wcjd.v30.i9.393
Circ_0044516靶向调控miR-516a-5p对胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响
方惠, 李莹, 桑怡
方惠, 李莹, 浙江中医药大学附属杭州市中医院特检科 浙江省杭州市 310000
方惠, 本科, 研究方向为内科学.
桑怡, 浙江中医药大学附属杭州市中医院消化科 浙江省杭州市 311700
作者贡献分布: 此课题由方惠、李莹共同设计; 研究过程由方惠、李莹操作完成;研究所用试剂及分析工具由方惠、李莹提供; 数据分析由桑怡完成; 论文写作由方惠、李莹、桑怡完成.
通讯作者: 方惠, 特检科医师, 310000, 浙江省杭州市西湖区体育场路453号,浙江中医药大学附属杭州市中医院. fh15068756396@163.com
收稿日期: 2022-01-21
修回日期: 2022-03-02
接受日期: 2022-04-19
在线出版日期: 2022-05-08
文章亮点
实验背景

CircRNA具有共价闭合结构, 已成为近年的人类疾病和肿瘤研究的热点, 研究证明circRNA与胃癌发病有关, 可介导参与胃癌细胞增殖、迁移等过程.

实验动机

在胃癌组织和细胞中circ_0044516高表达,通过靶向调控miRNA促进胃癌细胞生物学行为. 在线生物信息学软件预测显示, miR-516a-5p与circ_0044516相互结合,而miR-516a-5p在非小细胞肺癌细胞中低表达, 但是随胃癌细胞生物学行为暂不清楚. 本研究主要观察circ_0044516可能通过靶向调控miR-516a-5p对胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响.

实验目标

本研究主要观察circ_0044516对胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响, 及其是否能通过调控miR-516a-5p影响胃癌细胞生物学行为, 旨在为胃癌研究提供新的作用靶点.

实验方法

qRT-PCR实验检测胃上皮细胞GES-1和胃癌细胞SNU-16、HGC-27中circ_0044516、miR-516a-5p表达水平. 将HGC-27细胞分为si-NC组、si-circ_0044516组、miR-NC组、miR-516a-5p组、si-circ_0044516+anti-miR-NC组、si-circ_0044516+anti-miR-516a-5p组. qRT-PCR实验检测circ_0044516和miR-516a-5p表达水平; 噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT)实验检测细胞增殖; 流式细胞术实验检测细胞凋亡; Transwell实验检测细胞迁移; Western blot实验检测p21、Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2, MMP2)蛋白表达; 双荧光素酶报告实验检测circ_0044516和miR-516a-5p靶向关系.

实验结果

胃癌细胞circ_0044516高表达, 而miR-516a-5p低表达, 沉默circ_0044516或过表达miR-516a-5p抑制胃癌细胞增殖和迁移, 并诱导细胞凋亡, 抑制miR-516a-5p对沉默circ_0044516处理胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响.

实验结论

胃癌细胞circ_0044516高表达, 沉默circ_0044516抑制胃癌细胞增殖和迁移, 并诱导细胞凋亡, 作用机制可能与调控miR-516a-5p有关.

展望前景

本实验也存在不足的地方, 只注重研究体外细胞功能实验, 关于体内实验及可能相关信号通路等需要后一步继续验证.