修回日期: 2021-10-23
接受日期: 2022-01-12
在线出版日期: 2022-01-28
大量实验证实丹酚酸B(salvianolic acid B, Sal B)在人体、动物的多个系统及细胞中具有抗炎、抗氧化、清除氧自由基的作用, 前期我们已经初步证实其可通过多种机制对非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)起治疗作用. 已有研究证实细胞焦亡在NAFLD发病及其向非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis, NASH)进展的过程中起了重要的作用, 细胞焦亡通过调控打孔蛋白GSDMD(gasdermin D)的表达, 抑制NAFLD模型中的细胞焦亡过程可以保肝抗炎, 延缓病情的进展.
通过观察Sal B对NASH大鼠肝脏氧化物蓄积及脂质过氧化程度的影响, 证实其对NASH的治疗效果. 检测炎症因子及焦亡相关蛋白表达水平, 证实Sal B可减轻NASH细胞内的焦亡反应.
验证Sal B可否有效减轻NASH细胞内过氧化物活性氧(reactive oxygen species, ROS)、脂氧化物含量, 以及油红O染色验证治疗组细胞内脂滴变化来证实抑制剂组和治疗组都可有效减少焦亡相关蛋白表达, 减轻炎症反应, 缓解NASH发展.
通过棕榈酸(palmitic acid, PA)干预HepG2细胞建立NASH模型, 使用Sal B溶液、Caspase抑制剂干预, 建立对照组、NASH模型组、Sal B治疗组及抑制组. 通过生化指标、油红O染色观察细胞病理变化及脂滴聚集. 免疫荧光探针测定细胞内POS含量; 酶联免疫吸附试验检测各组细胞上清液白细胞介素-18(interleukin 18, IL-18)、白细胞介素1β(interleukin 1β, IL-1β)表达量; Western Blot检测消皮素(gasdermin D, GSDMD)、GSDMD的N端结构域(GSDMD-N)、核苷酸寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3, NLRP3)和半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)焦亡相关蛋白.
模型组细胞内脂质小体及活性氧(reactive oxygen species, ROS)蓄积明显, IL-1β、IL-18等促炎因子分泌增多, 炎症小体NLRP3、焦亡相关蛋白Caspase-1、GSDMD、GSDMD-N表达均升高. 使用Sal B干预治疗或VX-765抑制剂处理后可逆转PA造成的脂质及ROS蓄积, IL-1β及IL-18炎症因子的分泌, 同时可下调NLRP3、Caspase-1、GSDMD、GSDMD-N等焦亡相关蛋白表达.
PA可诱导肝脏细胞焦亡发生, 丹酚酸B通过对焦亡通路NLRP3/Caspase-1/GSDMD的抑制作用减轻炎症反应, 缓解NASH进展.
通过研究Sal B对NASH细胞焦亡主要相关蛋白的调节, 发觉Sal B在NAFLD中多途径、多靶点的治疗优势, 为探索NAFLD新型治疗药物提供新的研究领域.