Published online 2021-09-08. doi: 10.11569/wcjd.v29.i17.1026
修回日期: 2021-06-02
接受日期: 2021-07-27
在线出版日期: 2021-09-08
随着医医疗水平的提高, 胃癌的早期诊断及治疗取得了明显成效, 但患者的死亡率仍居高不下, 且预后较差, 侵袭与转移是影响患者预后的重要因素. 因此, 探究胃癌的发病机制, 抑制胃癌细胞的侵袭转移, 改善患者预后意义重大. 乙酰肝素酶(heparanase, HPSE)是一种内源性糖苷内切酶, 有研究发现, 期在胃癌组织中的表达水平明显升高. 但关于乙酰肝素酶2 (heparanase, HPSE2)在胃癌中的相关作用及其作用机制尚不明确. 本研究旨在HPSE2在胃癌中的相关作用及其作用机制.
分析HPSE2通过抑制核转录因子κB (NF-κB)、wnt基因/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路调控胃癌细胞恶性生物学行为的机制.
为明确HPSE2在胃癌恶性进程中的作用, 我们通过免疫组化法测定胃癌组织及癌旁正常组织HPSE2表达水平, 探讨期潜在的临床价值, 后通过质粒转染获得过表达HPSE2的胃癌细胞株, 分析HPSE2表达水平对胃癌细胞生物学行为的影响, 并进行下游基因与分子通路的筛选验证, 进一步揭示HPSE2发挥肿瘤调控作用的分子机制, 为探索HPSE2可否作为胃癌治疗的新靶点提供初步理论基础.
收集2019-09/2021-04期间在本院进行手术切除治疗的74例胃癌患者的胃癌组织及癌旁正常组织, 测定HPSE2的表达水平. 将人胃癌细胞系MKN-28细胞进行传代培养并转染, 获得HPSE2过表达组及对照组. 测定各组细胞增殖能力、细胞凋亡率、细胞侵袭及迁移能力, 并测定细胞中HPSE2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、TGF-β1、p-NF-κB p65、β- catenin表达水平变化.
与癌旁正常组织对比, 胃癌组织中HPSE2表达水平明显降低(P<0.01). 与对照组比较, HPSE2过表达组HPSE2表达水平明显升高(P<0.01). 两组1 d时细胞增殖能力无明显差异(P>0.05); 与2 d与对照组比较, HPSE2过表达组细胞增殖能力明显降低(P<0.05或P<0.01). 与对照组比较, HPSE2过表达组细胞凋亡率及Bax、E-cadherin表达水平均明显升高, 细胞侵袭、迁移能力及Bax、Suivivin、N-cadherin、Vimentin、TGF-β1、p-NF-κB p65、β- catenin表达水平均明显降低(P<0.01).
上调HPSE2表达能够明显抑制细胞增殖、侵袭及迁移, 抑制细胞发生EMT, 促进细胞凋亡, 其可能是通过抑制NF-κB及Wnt/β-catenin信号通路的激活实现.
本次研究中, 我们发现, 上调HPSE2表达能够明显抑制细胞增殖能力(MTT实验证明)、侵袭能力(Transwell实验证明)及迁移能力(Transwell实验证明), 促进细胞凋亡能力(流式细胞仪及蛋白质印记法测定证明). 我们进一步分析了这种现象发生的原因, 发现, HPSE2处理后的MKN-28细胞中p-NF-κB p65、β-catenin表达水平均明显下降. 表明HPSE2在抗肿瘤, 尤其是抑制胃癌细胞增殖、侵袭、迁移房间具有一定作用, 为今后胃癌的临床治疗用药的选择提供了帮助. 接下来本实验将继续挖掘HPSE2对胃癌细胞中各个通路的影响及其机制, 并将其应用至在体实验模型中证明, 从而能够更全面的探索HPSE2对胃癌细胞基因表达差异的影响.