miR-15a-5p靶向PD-L1对食管癌进展、预后与肿瘤免疫反应的影响

Abstract

背景

微核糖核酸(microRNA, miR)-15a-5p与细胞程序性死亡蛋白配体1(programmed death-ligand 1, PD-L1)在多种肿瘤进展、治疗与预后中发挥重要作用, 但其在食管癌中的作用尚不完全清楚.

目的

研究miR-15a-5p与PD-L1表达对食管癌进展与预后的影响, 并分析二者的靶向关系以及二者调控食管癌细胞生物学行为的机制.

方法

用癌症基因组图谱数据库、基因表达综合数据库和RNA相互作用组百科全书泛癌分析数据库分析食管癌中miR-15a-5p和PD-L1基因的表达, 通过Kaplan-Meier生存分析研究miR-15a-5p和PD-L1的表达与食管癌无病生存期以及总生存期的关系. 信息学和荧光活性实验检测miR-15a-5p与PD-L1的靶向关系. 体外培养食管癌细胞, 转染miR-15a-5p mimics或miR-NC后, 分别用Western blot、流式细胞术、免疫荧光实验检测PD-L1表达. 将转染miR-15a-5p mimics或miR-NC的食管癌细胞与CD8+ T细胞共培养, 流式细胞术检测干扰素-γ(interferon-γ, INF-γ)阳性CD8+ T细胞比例, ELISA检测共培养体系中上清液中INF-γ和白细胞介素(interleukin, IL)-2含量.

结果

miR-15a-5p在食管癌组织中表达水平较癌旁非癌变组织降低(P<0.05). 以miR-15a-5p表达水平的中位数为分界线, 随T分期和肿瘤大小增加和淋巴结转移,miR-15a-5p低表达率增加(P<0.05); 相比于miR-15a-5p低表达的食管癌患者, miR-15a-5p高表达显示出较长的无病生存期和总生存期(P<0.05), miR-15a-5p高表达同时PD-L1低表达的无病生存期和总生存期更长(P<0.05). 在miR-15a-5p 高表达的食管癌患者中PD-L1 mRNA多呈低表达. PD-L1为miR-15a-5p的靶基因. 过表达miR-15a-5p抑制食管癌细胞中总PD-L1及膜PD-L1表达(P<0.05). 在食管癌细胞中过表达miR-15a-5p可促进共培养体系中CD8+ T细胞的激活(即: 共培养体系中INF-γ阳性CD8+ T细胞比例以及共培养体系中上清液中INF-γ和IL-2含量增加).

结论

miR-15a-5p可通过靶向PD-L1增强食管癌细胞的肿瘤免疫反应, 且miR-15a-5p/PD-L1可作为食管癌诊断及预后生物标记物.

Keywords: miR-15a-5p; 食管癌; PD-L1; 预后; 肿瘤免疫反应

核心提要: 微核糖核酸(microRNA, miR)-15a-5p与细胞程序性死亡蛋白配体1(programmed death-ligand 1, PD-L1)不仅是食管癌诊断及预后的潜在生物标记物, miR-15a-5p还能通过靶向PD-L1来增强CD8+ T细胞的活化.