基础研究
Copyright ©The Author(s) 2024. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2024-02-28; 32(2): 141-147
Published online 2024-02-28. doi: 10.11569/wcjd.v32.i2.141
CDH1基因对小鼠胃类器官生长和E-caherin表达的作用机制
邵伟, 余友杰, 夏海娜, 郑优优, 孙展杭, 严皓哲
邵伟, 郑优优, 严皓哲, 舟山市普陀区人民医院消化内科 浙江省舟山市 316100
邵伟, 硕士, 研究方向为消化病学.
余友杰, 舟山市普陀区人民医院血液肿瘤科 浙江省舟山市 316100
夏海娜, 舟山市普陀区人民医院病理科 浙江省舟山市 316100
孙展杭, 舟山市普陀区人民医院浙江舟山消化病防治研究所 浙江省舟山市 316100
基金项目: 2021年度舟山市市级公益类计划项目, No. 2021C31081.
作者贡献分布: 实验设计为邵伟和余友杰; 实验实施为邵伟和余友杰与夏海娜; 郑优优、孙展杭进行实验评估; 邵伟执笔; 严皓哲审校.
通讯作者: 余友杰, 副高级, 316100, 浙江舟山普陀区东港文康街19号, 舟山市普陀区人民医院血液肿瘤科. 13515809725@163.com
收稿日期: 2023-11-16
修回日期: 2023-12-19
接受日期: 2024-01-26
在线出版日期: 2024-02-28
Abstract
背景

CDH1基因编码的蛋白质E-cadherin在维持上皮组织完整性中发挥重要作用, 了解CDH1基因对胃类器官生长和E-cadherin表达的作用机制对于揭示器官发育的分子基础至关重要. 因此假设CDH1基因通过调控E-cadherin的表达参与调控胃类器官的发育和生长过程.

目的

探究钙黏蛋白1(cadherin-1, CDH1)基因对小鼠胃类器官生长和E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的作用机制.

方法

采用CRISPR/Cas9基因敲除技术获得CDH1-/-C57BL/6品系小鼠10只, 及野生型(WT)C57BL/6品系小鼠10只作为实验对照组. 分离小鼠胃组织并培养胃类器官, 免疫荧光染色观察胃类器官中E-cadherin表达, 比较小鼠胃类器官数量和直径, MTT检测胃类器官细胞活力, 蛋白质印迹法和RT-PCR法检测胃类器官中E-cadherin蛋白和mRNA表达.

结果

在光学显微镜下可见小鼠胃组织在培养基中不断生长与分裂, 从第0 d开始组织在24 h内形成囊性结构, 然后经历快速生长阶段. 器官样细胞扩展为大的3D球形结构, 到第5 d后逐渐出芽并开始形成胃类器官, 提示胃类器官初步构建. 免疫荧光染色结果显示, WT C57BL/6小鼠胃类器官中E-cadherin呈阳性表达, 进一步提示胃类器官成功构建. 和WT C57BL/6小鼠相比, CDH1-/-C57BL/6小鼠胃类器官数量、胃类器官直径、吸光度值及胃类器官中E-cadherin蛋白和E-cadherin mRNA相对表达量均明显减少(P<0.05).

结论

CDH1基因敲除可抑制胃类器官生长形成及E-cadherin表达.

Keywords: CDH1; 胃类器官; 生长; E-cadherin

核心提要: 钙黏蛋白1(cadherin-1, CDH1)基因敲除抑制了小鼠胃类器官的生长形成, 并降低了E-钙黏蛋白的表达水平. 这一发现揭示了CDH1基因在胃类器官发育过程中的重要作用, 为了解器官发育的分子机制提供了重要线索.