基础研究
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世界华人消化杂志. 2023-04-08; 31(7): 256-267
Published online 2023-04-08. doi: 10.11569/wcjd.v31.i7.256
基于网络药理学研究一贯煎治疗肝纤维化的有效成分及作用机制
崔欣怡, 姜晓丹, 李汶航, 张睿, 油红捷, 唐佐青, 马赟, 杨铮, 车念聪, 刘文兰
崔欣怡, 姜晓丹, 李汶航, 张睿, 马赟, 杨铮, 车念聪, 刘文兰, 首都医科大学中医药学院 北京市 100069
崔欣怡, 首都医科大学中医药学院中医诊断学专业在读硕士研究生, 主要从事中医药治疗慢性肝病疗效机制的研究.
李汶航, 成都中医药大学附属眉山医院(眉山市中医医院)消化内科 四川省眉山市 620000
油红捷, 唐佐青, 首都医科大学基础医学院 北京市 100069
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 81573879; 北京市自然科学基金资助项目, No. 7182021.
作者贡献分布: 崔欣怡与刘文兰对此文所作贡献两均等; 此课题由崔欣怡、刘文兰、张睿、油红捷、唐佐青、马赟、杨铮、车念聪设计; 研究过程由崔欣怡与李汶航操作完成; 数据分析由崔欣怡完成; 本论文写作由崔欣怡、姜晓丹、刘文兰完成.
通讯作者: 刘文兰, 教授, 博士生导师, 副主任医师, 100069, 北京市右安门外西头条10号, 首都医科大学中医药学院. wenlanliu1900@126.com
收稿日期: 2022-12-12
修回日期: 2023-01-22
接受日期: 2023-03-20
在线出版日期: 2023-04-08
Abstract
背景

中药复方具有多成分综合调节的特点, 在肝纤维化防治中显示出独特的优势. 一贯煎始载于魏之琇所著《续名医类案》, 是滋阴疏肝的著名方剂, 能够改善肝纤维化症状, 研究其抗肝纤维化机制有助于药物开发和推广.

目的

通过网络药理学探究一贯煎治疗肝纤维化的机制并实验验证.

方法

利用文献和TCMSP数据库收集一贯煎成分及靶点, GeneCard、OMIM数据库收集肝纤维化疾病靶点. 通过STRING数据库构建一贯煎-肝纤维化蛋白互作网络(protein-protein interaction, PPI)子网络, 应用重启随机游走算法获得关键基因, 通过DAVID数据库进行基因本体(gene ontology, GO)富集分析及京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)富集分析. 动物实验验证, 18只SD大鼠随机分为正常组、模型组、一贯煎组. 模型组、一贯煎组大鼠采用腹腔注射50%四氯化碳(carbon tetrachloride, CCl4)橄榄油溶液造模6周, 正常组注射等量橄榄油. 造模结束后一贯煎组每天灌胃一贯煎溶液(6.67 g/kg)共4 wk, 其他组灌胃等量蒸馏水, 取血和肝脏. 全自动生化仪检测血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)和天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase, AST). HE、Masoon染色观察肝脏病理学变化. Western blot法和qRT-PCR法检测肝脏关键蛋白表达水平和mRNA转录水平.

结果

筛选得到一贯煎成分52个, 潜在作用靶点186个, 肝纤维化疾病靶点1080个, 得到一贯煎治疗肝纤维化的关键基因, 其中亲和度前10的基因为STAT6、SRC、MAPK3、STX1A、EP300、STAT3、PLG、CTNNB1、CDKN1B、CANX, 亲和度前50的基因KEGG富集得到PI3K-Akt信号通路、FoxO信号通路等134条. 动物实验结果发现, 一贯煎能够改善CCL4肝纤维化大鼠肝功能和减轻纤维化, 降低α-肌动蛋白表达, 促进信号转导和转录激活因子6(signal transducer and activator of transcription 6, STAT6)磷酸化, 提高过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator activated receptor-γ, PPAR-γ)、白细胞分化抗原163(cluster of differentiation 163,CD163)蛋白表达和精氨酸酶1、白细胞分化抗原206、CD163mRNA转录水平, 降低白细胞介素6的mRNA转录水平.

结论

一贯煎治疗肝纤维化作用涉及多个成分、多条信号通路, 其中包括STAT6/PPAR-γ通路.

Keywords: 一贯煎; 肝纤维化; 网络药理; 重启随机游走

核心提要: 本研究基于网络药理学方法, 通过构建一贯煎-肝纤维化蛋白互作子网络, 应用重启随机游走算法探索一贯煎治疗肝纤维化的作用机制, 实验验证表明一贯煎抗肝纤维化作用与调控STAT6/PPAR-γ通路促进巨噬细胞向M2型极化有关.