基础研究
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世界华人消化杂志. 2020-10-28; 28(20): 1009-1015
Published online 2020-10-28. doi: 10.11569/wcjd.v28.i20.1009
内质网应激-自噬肝癌SMMC-7721细胞模型的复制及金刚藤的干预
凌江红, 文一惠, 周芬敏, 陈珺明, 郭锦荣
凌江红, 周芬敏, 陈珺明, 郭锦荣, 上海健康医学院附属周浦医院中医科 上海市 200021
凌江红, 上海中医药大学附属曙光医院消化科 上海市 200021
凌江红, 博士, 教授, 主要从事中医药防治消化系统疾病诊治研究.
文一惠, 广西医科大学第一附属医院中医科 广西壮族自治区南宁市 530021
基金项目: 上海市浦东新区卫生系统重点学科建设项目, No. PWZxk2017-02; 国家自然科学基金资助项目, No. 81973774.
作者贡献分布: 凌江红与文一惠对此文所作贡献均等; 此课题由凌江红、周芬敏、陈珺明及郭锦荣设计; 研究过程由凌江红、文一惠、周芬敏、陈珺明及郭锦荣操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由凌江红提供; 数据分析由文一惠完成; 本论文写作由凌江红与文一惠完成.
通讯作者: 凌江红, 博士, 教授, 200021, 上海市浦东新区周园路1500号, 上海健康医学院附属周浦医院中医科. 459183870@qq.com
收稿日期: 2020-07-20
修回日期: 2020-08-18
接受日期: 2020-09-21
在线出版日期: 2020-10-28
Abstract
背景

内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS) -自噬是肝癌细胞一种自我保护性机制. 内质网(endoplasmic reticulum, ER)应激诱导剂二硫苏糖醇(dithiothreitol, DTT)能诱导肝癌细胞ERS-自噬. 课题组前期研究证实金刚藤具有抑制肝癌细胞的作用, 那么肝癌细胞ERS-自噬是否影响金刚藤抑制肝癌细胞的作用尚不清楚.

目的

探讨ERS-自噬肝癌SMMC-7721细胞模型的复制及金刚藤的干预.

方法

ERS-自噬肝癌SMMC-7721细胞模型的复制: 采用不同剂量的DTT(50、200、500 μmol/L)处理SMMC-7721细胞24 h, 设DTT 0 μmol/L组为control组, 透射电镜观察各模型组细胞自噬小体, 运用western blot法测定各组细胞微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ, LC3-Ⅱ)蛋白的表达. 金刚藤对ERS-自噬肝癌SMMC-7721细胞存活率的影响: 将SMM C-7721细胞分为空白组(control组)、金刚藤组(JGT组)、DTT+JGT组, control、JGT组分别给予空白血清、金刚藤含药血清处理, DTT+JGT组予DTT构建的ERS模型后给予金刚藤含药血清处理, 采用CCK-8法检测细胞的存活率.

结果

DTT(50、200、500 μmol/L)组细胞的细胞质内均可见自噬小体, 随着DTT浓度的增加, 自噬小体数量逐渐增加, DTT 500 μmol/L组可见大量自噬小体; 各模型组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达: 与control组比较, DTT(50、200、500 μmol/L)组细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达均显著升高(P均<0.05); 与DTT 200 μmol/L组比较, 500 μmol/L组LC3-Ⅱ蛋白的表达显著升高(P<0.05). 金刚藤对ERS-自噬肝癌细胞模型存活率的影响: JGT、DTT+JGT组细胞存活率均显著低于control组(P均<0.05); JGT组细胞存活率显著低于DTT+JGT组(P<0.05).

结论

DTT可诱导肝癌SMMC-7721细胞ERS-自噬; 金刚藤可抑制SMMC-7721细胞的存活率, DTT诱导的ERS-自噬可抵抗金刚藤抑制SMMC-7721细胞的存活率.

Keywords: 金刚藤; 肝癌; 内质网应激; 自噬; 细胞增殖

核心提要: 本研究证实了二硫苏糖醇(dithiothreitol, DTT)能够诱导肝癌细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)-自噬; DTT诱导的ERS-自噬可抵抗金刚藤抑制SMMC-7721细胞的存活率.