miR-181a-5p调控LIF的表达调节胰腺腺泡细胞凋亡的分子机制

Abstract

背景

急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)发病迅速, 并发全身感染, 因此早期的高效治疗对控制病情起到关键作用. 微小RNA(microRNA, miRNA)在AP中的作用机制及临床应用的研究成为近几年的热点. 其在AP发生发展及转归中的作用有助于为AP的诊断和治疗提供新思路.

目的

探讨miR-181a-5p对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞AR42J凋亡的影响及机制.

方法

运用ELISA法检测雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞中AMY、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha, TNF-α)、白介素-6(interleukin-6, IL-6)的表达; 将Cerulein+anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、Cerulein+anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、Cerulein+si-con组(转染si-con)、Cerulein+si-白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)组(转染si-LIF), 均用脂质体法转染至AR42J细胞, 再用15 nmol/L 的雨蛙素处理8 h; 流式细胞术法检测各组细胞的凋亡; qRT-PCR检测各组细胞中miR-181a-5p mRNA和LIF mRNA的表达; Western blot检测各组细胞中LIF、caspase-3的蛋白表达; 双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性.

结果

与对照组相比, 雨蛙素处理8 h是AMY、TNF-α和IL-6的含量均升高的时间点, 且细胞凋亡率显著降低(P<0.05); 与Control组相比, Cerulein组AR42J细胞中miR-181a-5p mRNA表达显著下调, LIF mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.05); 过表达 miR-181a-5p、敲减LIF均可抑制雨蛙素诱导的AR42J细胞凋亡的促进作用; miR-181a-5p可抑制野生型LIF细胞的荧光活性, 且可负向调控LIF的蛋白表达.

结论

miR-181a-5p可抑制雨蛙素诱导的AR42J细胞的凋亡, 其机制可能与靶向LIF有关, 将可为AP的治疗提供新方向.

Keywords: miR-181a-5p; 白血病抑制因子; 凋亡; 急性胰腺炎

核心提要: miR-181a-5p在胰腺炎中发挥保护作用的机制与靶向抑制下游的促炎因子白血病抑制因子的表达密切相关.