基础研究
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世界华人消化杂志. 2019-03-28; 27(6): 352-360
Published online 2019-03-28. doi: 10.11569/wcjd.v27.i6.352
青藤碱通过MALAT1靶向miR-141调控胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究以及临床意义
陈小兰, 苏丽丽
陈小兰, 苏丽丽, 台州市中西医结合医院内科(温岭市三院) 浙江省温岭市 317523
陈小兰, 主治医师, 研究方向为胃癌机制等.
作者贡献分布: 陈小兰与苏丽丽所有作者均负责实验设计、实施、数据分析整理以及文章的撰写.
通讯作者: 陈小兰, 主治医师, 317523, 浙江省温岭市泽国镇商城大道350号, 台州市中西医结合医院内科(温岭市三院). y15305882668@163.com
电话: 0576-89664142
收稿日期: 2018-12-26
修回日期: 2019-01-21
接受日期: 2019-02-26
在线出版日期: 2019-03-28
Abstract
背景

胃癌(gastric cancer, GC)是常见的消化系统恶性肿瘤之一, 其发病率和死亡率都很高. 据报道, 青藤碱在GC细胞中有抗肿瘤活性. 但其机制有待进一步研究.

目的

研究青藤碱通过肺癌转移相关转录本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1, MALAT1)靶向miR-141调控GC细胞增殖、侵袭和迁移的机制及其临床意义.

方法

分别用浓度为100 μmol/L, 200 μmol/L和400 μmol/L的青藤碱处理体外培养的GCAGS细胞(分别记为L-SIN组, M-SIN组和H-SIN组), 分别用MTT法和Transwell小室实验检测细胞的增殖和迁移、侵袭能力的变化, RT-qPCR检测MALAT1与miR-141的表达情况. 利用LipofectamineTM2000转染构建下调MALAT1或上调miR-141的AGS细胞, RT-qPCR检测转染效果及miR-141的表达情况, 检测细胞的增殖率和迁移、侵袭情况. 预测miR-141靶标基因结合位点, 双荧光素酶报告基因实验验证miR-141和MALAT1的靶向关系, 检测各处理组miR-141相对表达量. 用400 μmol/L的青藤碱处理仅上调MALAT1或与miR-141同时上调的GC细胞, 检测细胞的增殖率和迁移、侵袭情况.

结果

与人正常胃粘膜上皮细胞GES-1相比, Control组AGS细胞活力和迁移、侵袭能力均明显增强(P<0.05), MALAT1 mRNA表达量明显升高(P<0.05), 而miR-141 mRNA表达量明显降低(P<0.05); 与Control组相比, L-SIN组, M-SIN组和L-SIN组细胞活力和迁移、侵袭能力均明显下降(P<0.05), MALAT1表达量明显降低(P<0.05), 而miR-141表达量明显升高(P<0.05), 均呈浓度依赖性. 转染si-MALAT1后, MALAT1表达量明显降低(P<0.05), 而miR-141表达量明显升高(P<0.05); AGS细胞活力和迁移、侵袭能力均明显降低. 转染miR-141 mimics对AGS细胞有同样的影响(P<0.05), 并上调miR-141表达水平(P<0.05). 经Starbase预测miR-141和MALAT1 3'UTR存在靶向结合位点, 双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证了miR-141是MALAT1的靶基因. 仅上调MALAT1可以逆转青藤碱对GC细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用; 同时上调MALAT1和miR-141可部分恢复青藤碱对GC细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用(P<0.05).

结论

青藤碱能够抑制GC细胞增殖、侵袭和迁移, 其作用机制与通过MALAT1靶向调控miR-141有关.

Keywords: 青藤碱; 胃癌AGS细胞; MALAT1; miR-14

核心提要: 据报道, 中药提取物青藤碱对胃癌(gastric cancer, GC)有抑制作用. 本研究发现, 青藤碱以浓度依赖性方式抑制GC细胞的增殖、转移和侵袭, 其作用机制与通过肺癌转移相关转录本1靶向miR-141.