Published online 2019-12-28. doi: 10.11569/wcjd.v27.i24.1473
修回日期: 2019-12-10
接受日期: 2019-12-20
在线出版日期: 2019-12-28
麦冬皂苷D(ophiopogonin D, OPD)是中药麦冬提取物中重要的单体成分且具有抗癌作用, 但是否具有抗肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)作用还未知. 本研究假设OPD能够通过上调miR-519d-3p表达进而下调真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor 4E, EIF4E)表达发挥抗HCC作用.
探讨OPD对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制.
培养HCC细胞HepG2和MHCC97, 不同浓度(2.5 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L)的OPD作用48 h后, 四甲基噻唑蓝染色法(methylthiazoletrazolium, MTT)检测细胞增殖, Transwell检测细胞迁移和侵袭, 实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, RT-qPCR)检测细胞中miR-519d-3p和EIF4E mRNA表达, Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)、MMP-9和EIF4E蛋白表达. 双荧光素酶报告基因实验验证miR-519d-3p和EIF4E 之间关系. 转染miR-519d-3p mimics、si-EIF4E构建miR-519d-3p 过表达或EIF4E表达抑制的HepG2和MHCC97细胞, RT-qPCR检测细胞中miR-519d-3p表达或Western blot检测EIF4E蛋白表达验证转染效率. MTT、Transwell、Western blot分别检测过表达miR-519d-3p或抑制EIF4E表达对HepG2和MHCC97细胞增殖、迁移和侵袭, 及CyclinD1、p21、MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响.
与对照组比, OPD组HepG2细胞抑制率显著升高(P<0.05), 迁移和侵袭数显著降低(P<0.05), HepG2细胞中CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.05), p21蛋白表达显著升高(P<0.05), miR-519d-3p表达显著升高(P<0.05), EIF4E mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05), 且呈浓度依赖性. miR-519d-3p在HepG2细胞中靶向负调控EIF4E表达. miR-519d-3p过表达或抑制EIF4E表达均可抑制HepG2细胞增殖、迁移和侵袭. 抑制miR-519d-3p表达部分逆转了OPD对HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用.
OPD可能通过调控miR-519d-3p/EIF4E表达抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭.
核心提要: 麦冬皂苷D可抑制HCC细胞增殖、迁移和侵袭, 其作用机制与调控miR-519d-3p/EIF4E表达有关.