基础研究
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世界华人消化杂志. 2019-07-08; 27(13): 807-813
Published online 2019-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v27.i13.807
表达持续活化型ALK3抑制大鼠肝星状细胞活化
石慧, 柳长柏, 肖和杰
石慧, 海南医学院第一附属医院消化内科 海南省海口市 570000
石慧, 柳长柏, 三峡大学肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室 湖北省宜昌市 443000
石慧, 柳长柏, 肖和杰, 三峡大学肝病研究所 湖北省宜昌市 443000
石慧, 主治医师, 讲师, 主要从事消化系统疾病尤其是肝病临床及基础研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 81070348.
作者贡献分布: 主要实验、数据分析及文章起草由石慧完成; 课题设计、文章修改与审阅由柳长柏与肖和杰完成.
通讯作者: 柳长柏, 教授, 443000, 湖北省宜昌市大学路8号, 三峡大学肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室. 295489660@qq.com
收稿日期: 2019-03-20
修回日期: 2019-06-19
接受日期: 2019-06-25
在线出版日期: 2019-07-08
Abstract
背景

肝纤维化与肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSCs)上皮细胞间充质转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT)相关, TGF-β1在其中起着重要的作用, 而BMP7能够拮抗TGF-β1, 目前主要研究的是TGF-β/BMPs-Smad信号通路, ALK3属于BMPs的持续活化Ⅰ型受体, 在肝纤维化分子研究机制中较少运用.

目的

观察大鼠HSCs中稳定表达持续活化型ALK3时Smad1磷酸化及纤维化相关基因E-cadherin、α-SMA、col1A2等表达情况, 探讨BMP-7信号转导在肝纤维化发生发展过程中拮抗TGF-β1信号及其抗肝纤维化机制.

方法

建立体外培养大鼠HSCs (HSC-T6)持续活化型ALK3的稳定表达细胞株, MTT检测细胞的增殖; RT-PCR检测col1A2等相关分子mRNA水平; Western blotting检测Samd1、E-cadherin、α-SMA、col1A2蛋白表达和Smad1磷酸化; 显微镜下观察细胞形态.

结果

稳定表达持续活化型ALK3的HSC-T6细胞增殖受到抑制, Smad1磷酸化显著升高, α-SMA, col1A2表达下调, E-cadherin表达上调.

结论

BMP-7信号转导通过增强Samd1的磷酸化而拮抗TGF-β1致纤维化作用,抑制大鼠HSCs的活化.

Keywords: 骨成形蛋白7; Smadl; 磷酸化Smadl; 肝星状细胞

核心提要: 利用BMP-7Ⅰ型受体的持续性活化突变基因真核表达载体, 建立稳定高表达持续活化型BMP-7Ⅰ型受体ALK3细胞株. 无需BMP-7刺激, 持续活化型ALK3即可激活下游信号通路, 证实BMP-7信号转导通过增强Samd1的磷酸化而拮抗TGF-β1致纤维化作用, 抑制大鼠肝星状细胞的活化, 从而逆转肝纤维化,解决临床上肝硬化难以逆转的问题, 挽救早期肝硬化患者.