miR-7靶向Sp3对急性胰腺炎腺泡细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

Abstract

背景

重症急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是一种发病急、进展快、死亡率高的严重疾病, 其病因复杂, 近年来研究发现, miRNA在AP的发生和发展中发挥重要作用, 研究miRNA在AP中的机制对于AP的治疗、预防等有一定的帮助. 而miR-7与胃癌、肺癌、乳腺癌、胶质瘤等多种肿瘤的进展相关, 但在AP中研究鲜有报道.

目的

研究miR-7对AP腺泡细胞增殖、凋亡的影响及潜在的作用机制.

方法

用雨蛙素处理大鼠胰腺腺泡AR42J构建AP模型, 设置NC组、Cerulein组、miR-con组(转染miR-con)、miR-7组(转染miR-7 mimics)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-7组(转染anti-miR-7)、Cerulein+anti-miR-con组(Cerulein处理后转染anti-miR-con)、Cerulein+anti-miR-7组(Cerulein处理后转染anti-miR-7)、Cerulein+pcDNA组(Cerulein处理后转染pcDNA)、Cerulein+pcDNA-特异性蛋白3(specific protein 3, Sp3)组(Cerulein处理后转染pcDNA-Sp3)、Cerulein+anti-miR-7+si-con组(Cerulein处理后共转染anti-miR-7和si-con)、Cerulein+anti-miR-7+si-Sp3组(Cerulein处理后共转染anti-miR-7和si-Sp3), 用脂质体法转染至AR42J细胞. ELISA法检测雨蛙素处理AR42J细胞的淀粉酶(Amylase, AMY)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α, TNF-α)和白细胞介素-6(Interleukin-6, IL-6)的表达; qRT-PCR检测雨蛙素处理AR42J细胞中miR-7、Sp3 mRNA的表达水平; Western Blot检测Sp3蛋白表达; 流式细胞术检测细胞凋亡; 双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.

结果

雨蛙素处理AR42J细胞后, AMY、TNF-α、IL-6的表达均呈现先升高后下降的趋势, 且均在8 h时达到最大, 建模成功. 相较于NC组, Cerulein组miR-7的表达水平显著升高; Sp3 mRNA和蛋白的表达水平显著降低(P<0.01). 相较于Cerulein+anti-miR-con组, Cerulein+anti-miR-7组miR-7的表达水平显著下降, 细胞凋亡率显著降低(P<0.01). 相较于Cerulein+pcDNA组, Cerulein+pcDNA-Sp3组Sp3蛋白的表达水平显著升高, 细胞凋亡率显著降低(P<0.01). miR-7靶向负调控Sp3; 抑制Sp3表达逆转了敲减miR-7对雨蛙素处理AR42J细胞的凋亡抑制作用.

结论

敲减miR-7表达可以抑制AP腺泡细胞凋亡, 其机制可能与靶向调控SP3有关. 可为AP诊断和治疗提供新靶点和新思路.

Keywords: miR-7; 特异性蛋白3; 急性胰腺炎; 凋亡

核心提要: miR-7在雨蛙素构建的急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)模型细胞中高表达, miR-7靶向负调控特异性蛋白3(specific protein 3, Sp3), 敲减miR-7表达可以通过上调Sp3抑制AP腺泡细胞凋亡.