基础研究
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世界华人消化杂志. 2018-10-08; 26(28): 1635-1644
Published online 2018-10-08. doi: 10.11569/wcjd.v26.i28.1635
miR-144-3p靶向调控ABCG2信号通路对胃癌细胞侵袭和迁移的影响
吕弢, 俞兴旺, 胡静, 周东辉
吕弢, 俞兴旺, 胡静, 永康市第一人民医院监所门诊部 浙江省永康市 321300
吕弢, 主治医师, 主要从事消化内科基础与临床研究.
周东辉, 浙江大学医学院附属第一医院肿瘤外科 浙江省杭州市 310003
基金项目: 国家自然科学基金面上项目, No. 81272680.
作者贡献分布: 吕弢负责数据整理、分析及作图; 研究所用器材从周东辉处提供; 文章实验实施有胡静实施; 审核有俞兴旺负责审核与验收; 文章成稿有吕弢与胡静共同完成写作和文献添加与查询等工作.
通讯作者: 吕弢, 主治医师, 321300, 浙江省永康市浙江省永康市金山西路599号, 永康市第一人民医院监所门诊部. wangbinly8@126.com
电话: 0579-87575678
收稿日期: 2018-08-01
修回日期: 2018-08-29
接受日期: 2018-09-06
在线出版日期: 2018-10-08
Abstract
目的

研究miR-144-3p靶向调控ATP结合转运蛋白G家族成员2(ATP-binding transporter G family member 2, ABCG2)对胃癌(gastric cancer, GC)HGC-27细胞侵袭和迁移能力的影响, 并对其作用机制进行初步探讨.

方法

通过qRT-PCR检测人GCHGC-27细胞株和人胃黏膜上皮GES-1细胞株中miR-144-3p和ABCG2的表达情况; 通过靶基因预测软件预测miR-144-3p和ABCG2靶向结合位点, 通过双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向结合关系; 通过qRT-PCR检测miR-144-3p mimic或miR-144-3p inhibitor转染GC细胞后miR-144-3p及ABCG2的表达水平; 通过明胶酶谱实验检测对转染ABCG2 siRNA的GC细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)活性的影响; 通过Transwell侵袭和迁移实验检测转染miR-144-3p mimic、miR-144-3p inhibitor、ABCG2 siRNA对GC细胞侵袭和迁移能力的影响.

结果

与正常细胞组人胃黏膜上皮GES-1细胞株相比, GC细胞组人GCHGC-27细胞株中miR-144-3p的表达量明显降低, ABCG2的表达水平明显升高, 差异具有统计学意义(P<0.05); 靶基因预测miR-144-3p和ABCG2 3'UTR存在结合位点, 双荧光素酶报告基因实验证实了miR-144-3p和ABCG2靶向结合关系; 与对照组相比, 转染miR-144-3p mimic组GC细胞中miR-144-3p的表达明显升高, ABCG2的表达明显降低, 细胞侵袭和迁移能力显著降低, 差异具有统计学意义(P<0.05), 转染miR-144-3p inhibitor则表现出相反的作用; 明胶酶谱实验检测结果表明ABCG2 siRNA转染可显著抑制GC细胞中MMP-2和MMP-9蛋白活性, 抑制GC细胞侵袭和迁移能力, 差异具有统计学意义(P<0.05).

结论

MiR-144-3p能够抑制GC细胞侵袭和迁移能力, 其作用机制与靶向调控ABCG2-MMP-2/9信号通路有关.

Keywords: miR-144-3p; ATP结合转运蛋白G家族成员2; 胃癌细胞; 基质金属蛋白酶; 侵袭和迁移

核心提要: 本实验首次证实了ATP结合转运蛋白G家族成员2(ATP-binding transporter G family member 2, ABCG2)是miR-144-3p的靶基因, 且发现miR-144-3p能够抑制人胃癌(gastric cancer, GC)HGC-27细胞侵袭和迁移能力, 其作用机制与miR-144-3p通过靶向负调控ABCG2的表达, 介导基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9蛋白活性有关. 本研究以期为GC临床治疗及预后提供新的作用靶点.