基础研究
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世界华人消化杂志. 2017-02-18; 25(5): 412-419
Published online 2017-02-18. doi: 10.11569/wcjd.v25.i5.412
脂多糖对高糖环境下肝脏Kupffer细胞增殖和分泌及超微结构的影响
闫洪锋, 孙宏伟, 王平, 张诗琳, 杨建武, 徐冰心, 周金莲, 李成林, 崔彦
闫洪锋, 崔彦, 解放军医学院306医院普通外科 北京市 100101
孙宏伟, 王平, 张诗琳, 杨建武, 李成林, 崔彦, 解放军第306医院普通外科 北京市 100101
徐冰心, 解放军第306医院特种医学实验研究中心 北京市 100101
周金莲, 解放军第306医院病理科 北京市 100101
闫洪锋, 在读硕士, 主要从事消化外科的临床和基础研究.
作者贡献分布: 本课题由崔彦、周金莲及闫洪锋设计; 研究过程由闫洪锋完成; 孙宏伟、王平、张诗琳、杨建武、徐冰心及李成林参与部分实验工作并对实验数据和图表处理进行指导; 论文撰写由闫洪锋完成; 崔彦指导.
基金项目: 全军医学科研"十二五"重点课题基金资助项目, No. BWS11J051; 试验技术研究计划重点课题基金资助项目, No. SYFD1500128; 解放军第306医院医药卫生重点科研课题基金资助项目, No. 13ZD/12.
通讯作者: 崔彦, 教授, 主任医师, 100101, 北京市朝阳区安翔北里9号, 解放军第306医院普通外科. dryancui@aliyun.com
电话: 010-66356106
收稿日期: 2016-11-08
修回日期: 2016-12-06
接受日期: 2016-12-19
在线出版日期: 2017-02-18
Abstract
目的

探讨脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)对高糖环境下肝脏枯否细胞(Kupffer cells, KCs)增殖和分泌功能及超微结构的影响.

方法

将小鼠原代KCs培养扩增后随机分为4组: 高糖组[(high glucose, HG), 25.0 mmol/L D-葡萄糖], 正常对照组[(normal control, CON), 11.1 mmol/L D-葡萄糖], LPS+高糖组[(LPS+high glucose, LPS-HG), 25.0 mmol/L D-葡萄糖], LPS+正常对照组[(LPS normal+control, LPS-CON), 11.1 mmol/L D-葡萄糖]. 培养24 h后, LPS-HG和LPS-CON组分别加入等量LPS, 继续培养6 h后, 四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖, 流式细胞仪检测细胞周期, Luminex xMAP技术检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha, TNF-α)、白介素(interleukin, IL)-1β、IL-6水平, 透射电镜观察KCs细胞超微结构.

结果

MTT比色法测定结果显示, KCs经LPS干预6 h后吸光度(absorbance, OD)测值显著升高, HG和LPS-HG组的OD测值明显低于相对照的CON组和LPS-CON组(P<0.05). 流式细胞仪技术检测结果显示, KCs经LPS干预6 h后G0/G1期细胞分布明显下降, S期+G2/M期细胞分布明显升高(P<0.01). HG和LPS-HG组的G0/G1期细胞分布显著高于相对照的CON和LPS-CON组, HG和LPS-HG组的S期+G2/M期细胞分布显著低于相对照的CON和LPS-CON组(P<0.01); Luminex xMAP技术结果显示, KCs经LPS干预6 h后TNF-α、IL-1β、IL-6水明显升高, TNF-α和IL-1β的变化更为显著. 电镜观察KCs结果显示, HG组可见自噬体形成, CON组个别细胞胞质内仅见少量空泡; LPS-HG组可见大量空泡及自噬体形成, LPS-CON组可见空泡形成而未见自噬体.

结论

LPS能激活并强化高糖环境中肝脏KCs的增殖和分泌功能, 高糖环境和LPS均可引发肝脏KCs自噬等超微结构改变.

Keywords: 高糖环境; 脂多糖; 枯否细胞; 细胞增殖; 分泌功能; 超微结构

核心提要: 本研究发现, 脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)能激活并强化高糖环境中肝脏枯否细胞(Kupffer cells, KCs)的增殖和分泌功能, 高糖环境和LPS均可引发肝脏KCs自噬等超微结构改变.