临床研究
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世界华人消化杂志. 2017-01-28; 25(3): 234-240
Published online 2017-01-28. doi: 10.11569/wcjd.v25.i3.234
沉默诱骗受体3的表达对肝癌细胞生物学特性的影响
梁冬雨, 侯彦强, 娄晓丽
梁冬雨, 侯彦强, 娄晓丽, 上海交通大学附属第一人民医院松江分院中心实验室 上海市 201600
梁冬雨, 主管技师, 主要从事感染与免疫方面的研究.
作者贡献分布: 课题设计由梁冬雨与侯彦强共同完成; 侯彦强负责提供试剂; 娄晓丽负责研究过程与数据分析; 本论文写作由梁冬雨完成.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 81401937; 上海市卫生和计划生育委员会面上基金资助项目, No. 201540119.
通讯作者: 侯彦强, 主任技师, 201600, 上海市松江区中山中路748号, 上海交通大学附属第一人民医院松江分院中心实验室. houyanqiang@aliyun.com
收稿日期: 2016-10-19
修回日期: 2016-11-11
接受日期: 2016-11-21
在线出版日期: 2017-01-28
Abstract
目的

了解诱骗受体3(decoy receptor 3, DcR3)在肝癌细胞中的表达水平, 探讨其对肝癌细胞增殖、凋亡的影响并探讨其分子机制.

方法

采用real-time PCR、Western blot以及ELISA等方法检测肝癌细胞HepG2和Huh-7与正常肝细胞HL-7702和Chang liver中DcR3 mRNA和蛋白的表达以及分泌水平. 设计和构建DcR3小干扰RNA重组慢病毒(LV-shDcR3), 感染HepG2和Huh-7细胞, 同时以空病毒载体作为对照, Western blot验证沉默效果. 感染后通过CCK-8和平板克隆形成实验观察细胞增殖情况; 通过流式细胞术观察细胞凋亡情况; 通过Western blot检测凋亡相关蛋白如剪切型多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶的表达情况. 通过Western blot方法检测转染前后FasL、LIGHT和TRAIL等死亡配体的表达情况. 组间比较采用单因素方差分析.

结果

肝癌细胞HepG2和Huh-7中DcR3的mRNA和蛋白表达水平与正常肝细胞相比明显升高, 差异具有统计学意义. 细胞上清中DcR3的分泌水平也明显升高. 与空白组和感染对照组相比, 感染LV-shDcR3组, 肝癌细胞中DcR3的表达显著降低, 细胞生存率明显降低, 早期凋亡细胞比例明显升高, 凋亡相关蛋白表达水平明显升高. 与感染前相比, 肝癌细胞感染LV-shDcR3后, TRAIL和FasL的表达水平明显升高.

结论

DcR3在肝癌细胞中高表达, 下调肝癌细胞中DcR3的表达可以抑制细胞的增殖, 促进细胞凋亡, 其机制可能与TRAIL和FasL凋亡通路有关.

Keywords: 肝癌; 诱骗受体3; LV-shDcR3; 细胞增殖; 细胞凋亡

核心提要: 本研究应用细胞和分子生物学手段, 发现诱骗受体3(decoy receptor 3, DcR3)在肝癌细胞中高表达, 下调DcR3可以有效地抑制肝癌细胞的增殖能力, 诱导肝癌细胞凋亡, 其机制可能与阻断FasL和TRAIL介导的细胞凋亡途径有关, 为临床治疗肝癌提供新的思路和靶点.