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siRNA靶向干扰KLF17对结直肠癌细胞株SW480增殖和迁移的影响
瞿紫微, 孟庆彬, 肖新波, 陈华涛, 赵春翔, 张红芬, 武汉市第一医院胃肠外科 湖北省武汉市 430022
瞿紫微, 副主任医师, 主要从事消化系肿瘤疾病的治疗及临床研究.
作者贡献分布: 文章起草及文章的撰写由瞿紫微完成; 临床手术由瞿紫微、肖新波、陈华涛、赵春翔、孟庆彬及张红芬共同完成; 课题的设计、临床资料的整理及文章修改由孟庆彬完成.
基金项目: 湖北省卫生计生委科研基金资助项目 , No. WJ2015Z063 ; 武汉市卫生计生委科研基金资助项目 , No. WX16C39 ; 湖北省自然科学基金一般面上项目 , No. 2016CFB595 .
通讯作者: 孟庆彬, 博士, 主治医师, 430022, 湖北省武汉市硚口区中山大道215号, 武汉市第一医院胃肠外科. mengqingbin_007@163.com
收稿日期: 2016-10-13
修回日期: 2016-11-09
接受日期: 2016-11-30
在线出版日期: 2017-01-18
修回日期: 2016-11-09
接受日期: 2016-11-30
在线出版日期: 2017-01-18
Abstract
目的
利用小分子干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)技术探究体外沉默Krüppel样因子17(Krüppel like factor 17, KLF17)的基因表达对结直肠癌细胞株SW480细胞增殖和迁移的影响, 为抑制结直肠癌复发转移奠定理论基础.
方法
使用基因重组方法构建KLF17的siRNA真核质粒表达载体, 用电转染法转染至人结直肠癌SW480细胞中. 使用荧光定量PCR检测KLF17、E-钙黏素(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的基因表达水平; 用Western blot检测KLF17的蛋白表达以及细胞转移相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达. 用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖活性.
结果
与对照组相比, 转染siRNA后的SW480细胞培养48 h后增殖能力受到显著抑制, 且细胞形态由圆形或多边形变成梭形并向外伸出多个细胞突起; 转染siRNA后KLF17和E-cadherin蛋白表达以及基因表达水平显著降低, Vimentin的蛋白表达水平和基因表达水平显著升高.
结论
抑制KLF17的表达可以通过诱导结直肠癌细胞发生上皮-间质转化而促进其细胞的增殖以及转移.
Keywords: 结直肠癌; Krüppel样因子17; 上皮-间质转化; 侵袭
核心提要: 本文中干扰Krüppel样因子17(Krüppel like factor 17, KLF17)表达, SW480细胞形态发生变化与波形蛋白(Vimentin)的上调表达相符合. 说明干扰KLF17的表达可以通过诱导Vimentin的上调表达, 使肿瘤细胞形态发生变化, 从而促进肿瘤细胞上皮-间质转化的发生, 引发肿瘤细胞发生侵袭和转移.