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实时动态活细胞成像系统在单克隆筛选和克隆形成能力检测中的应用
刘长政, 高敦芹, 邢龙彬, 天津医科大学三中心临床学院 天津市 300170
焦晓磊, 刘辉, 骆莹, 高英堂, 卫生部人工细胞工程技术研究中心 天津市人工细胞重点实验室 天津市肝胆疾病研究所 天津市第三中心医院 天津市 300170
刘长政, 在读硕士, 主要从事肝癌原代肿瘤细胞培养及细胞异质性方面的研究.
基金项目: 天津市卫计委重点攻关基金资助项目, Nos. 15KG113, 16KG150 ; 天津市应用基础与前沿技术研究计划青年基金资助项目 , No. 15JCQNJC115000 .
作者贡献分布: 刘长政与高英堂对此文所作贡献均等; 此课题由高英堂设计; 研究过程由刘长政、焦晓磊、高敦芹及邢龙彬操作完成; 研究所用试剂及分析工具由高英堂提供; 数据分析由刘长政、刘辉及骆莹完成; 本论文写作由刘长政与高英堂完成.
通讯作者: 高英堂, 研究员, 300170, 天津市河东区津塘路83号, 卫生部人工细胞工程技术研究中心, 天津市人工细胞重点实验室, 天津市肝胆疾病研究所, 天津市第三中心医院. gaoyt816@163.com
电话: 022-84112148
收稿日期: 2017-01-15
修回日期: 2017-02-15
接受日期: 2017-02-27
在线出版日期: 2017-04-08
修回日期: 2017-02-15
接受日期: 2017-02-27
在线出版日期: 2017-04-08
Abstract
目的
利用IncuCyte ZOOM系统筛选肿瘤细胞单克隆和克隆形成能力检测.
方法
采用差速消化与差速贴壁分离培养原代肿瘤细胞; 在有限稀释法基础上, 采用IncuCyte ZOOM系统的实时动态追踪和全孔成像技术对肿瘤细胞进行单克隆筛选及克隆形成能力分析.
结果
从30例肿瘤组织中培养6株原代肿瘤细胞(TJ3ZX-02至07), 进一步从5株原代肿瘤细胞(TJ3ZX-03至07)中成功筛选出89个持续增殖的单克隆, 其中67个克隆扩增培养并冻存; 并且通过时序图准确有效地排除了18个不能持续增殖的单克隆和28个由2个及以上细胞组成的多克隆. 2例单克隆株(TJ3ZX-06-B11, TJ3ZX-07-H11)克隆形成能力分析表明, 14 d时平皿方法的克隆形成率(35.17%, 13.17%)高于IncuCyte ZOOM 96孔全孔成像(23.13%, 5.51%), 且差异有统计学意义(P<0.05); 延长至21 d时全孔成像的克隆形成率为(35.63%, 13.22%), 与平皿方法比较无统计学差异.
结论
IncuCyte ZOOM系统能够简便、准确、省时省力地实现单克隆细胞筛选和克隆形成率检测.
Keywords: 原代肿瘤细胞; 单克隆细胞; 克隆形成率
核心提要: 利用IncuCyte ZOOM系统进行原代肿瘤细胞的单克隆筛选和克隆形成力检测, 该方法使克隆筛选更加简便、准确, 时序性图像可判断细胞团来源等诸多优点, 为更好的研究肿瘤细胞异质性等生物学特性提供强有力的技术手段.