基础研究
Copyright ©The Author(s) 2017. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2017-01-08; 25(1): 56-63
Published online 2017-01-08. doi: 10.11569/wcjd.v25.i1.56
3T3-L1细胞中FoxO1基因沉默对高分子量脂联素表达的影响
沈震, 刘旭东, 赵晓芳
沈震, 鄂东医疗集团市中医医院(市传染病医院)肝病科 湖北省黄石市 435000
刘旭东, 赵晓芳, 广西中医药大学附属瑞康医院肝病科 广西壮族自治区南宁市 530011
沈震, 副主任医师, 主要从事脂肪性肝脏疾病的临床与基础研究.
作者贡献分布: 此课题由刘旭东设计; 研究过程由沈震与赵晓芳完成; 研究数据分析由赵晓芳完成; 本论文写作由刘旭东与沈震完成.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 81360596; 广西自然科学基金重点资助项目, No. 2014GXNSFDA118029; 广西八桂学者建设专项经费基金资助项目.
通讯作者: 刘旭东, 副主任医师, 530011, 广西壮族自治区南宁市华东路10号, 广西中药大学附属瑞康医院肝病科. lxdlhx@163.com
电话: 0771-2183081
收稿日期: 2016-10-06
修回日期: 2016-10-28
接受日期: 2016-11-07
在线出版日期: 2017-01-08
Abstract
目的

观察其受抑制后对二硫键A氧化还原酶样蛋白(disulfide-bond A oxidoreductase-like protein, DsbA-L)和高分子量(high molecular weight, HMW)脂联素表达的影响.

方法

利用短发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)构建慢病毒载体, 沉默3T3-L1细胞的叉头状转录因子O1(fork head box transcription factor O1, FoxO1)基因, 建立携带shRNA-FoxO1的慢病毒载体, 用qPCR和Western blot法从基因和蛋白水平筛选出最佳干扰效果的shRNA-FoxO1慢病毒载体. 在后续实验中利用此FoxO1-shRNA慢病毒载体沉默3T3-L1 FoxO1基因, 通过Western blot检测DsbA-L、HMW脂联素的表达.

结果

在3T3-L1细胞中筛选出shRNA-1组对FoxO1基因的表达的沉默效果最佳, 抑制率达到60%以上(与对照组相比, 基因相对表达量1.04±0.04 vs 0.37±0.05, P<0.001); 在后续实验选用shRNA-1干预3T3-L1细胞, 用Western blot检测, 并与对照组比较, 结果FoxO1蛋白表达显著减少(与GAPDH光密度比值分别是1.02±0.08和0.38±0.08, P<0.001), 而DsbA-L和HMW表达明显增加(DsbA-L与GAPDH光密度比值分别是0.28±0.06和0.53±0.07, P = 0.009; HMW脂联素与GAPDH光密度比值分别是0.05±0.02和0.11±0.03, P = 0.043).

结论

在3T3-L1细胞中, 沉默FoxO1基因后可促进DsbA-L和HMW脂联素的表达.

Keywords: 短发夹RNA; 3T3-L1; DsbA-L; 高分子量脂联素

核心提要: 脂联素是现在发现的体内对非酒精性脂肪性肝病唯一有益的细胞因子, 主要有脂肪细胞分泌合成. FoxO1是脂肪细胞中重要的信号分子, 作者发现, 利用短发夹RNA构建慢病毒载体, 沉默3T3-L1脂肪细胞的FoxO1后, 可促进二硫键A氧化还原酶样蛋白和高分子量脂联素的表达.