基础研究
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世界华人消化杂志. 2016-03-18; 24(8): 1159-1165
Published online 2016-03-18. doi: 10.11569/wcjd.v24.i8.1159
柴胡皂苷d对活化的HSC-T6细胞MMP-1、TIMP-1表达的影响及其分子机制
林柳兵, 阙任烨, 刘进锴, 沈艳婷, 陶智会, 李勇
林柳兵, 阙任烨, 沈艳婷, 李勇, 上海中医药大学附属上海市中医医院脾胃病科 上海市 200071
刘进锴, 中国人民解放军第二军医大学附属东方肝胆外科医院肝外一科 上海市 200433
陶智会, 上海市嘉定区中医医院肿瘤科 上海市 201800
林柳兵, 在读硕士, 主要从事消化系统的临床与基础研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 81573775; 上海市自然科学基金资助项目, No. 09ZR1429700; 上海市卫生系统百人计划基金资助项目, No. XBR2013120.
作者贡献分布: 林柳兵负责论文写作、实验研究及数据分析; 阙任烨负责论文修改、实验指导及数据分析; 林柳兵与刘进锴负责实验研究; 试剂耗材订购由沈艳婷完成; 陶智会完成文献检索; 李勇负责论文审核.
通讯作者: 李勇, 主任医师, 博士生导师, 200071, 上海市闸北区芷江中路274号, 上海中医药大学附属上海市中医医院脾胃病. liyong8256@126.com
电话: 021-56628311
收稿日期: 2016-01-16
修回日期: 2016-01-26
接受日期: 2016-02-18
在线出版日期: 2016-03-18
Abstract

目的: 研究柴胡皂苷d(saikosaponin-d, SSd)对活化的HSC-T6细胞内基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase-1, MMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase-1, TIMP-1)表达的影响及其相关分子机制, 探讨植物雌激素对肝纤维化的作用机制, 为临床应用植物雌激素提供理论依据.

方法: 体外培养大鼠肝星状细胞系HSC-T6, 细胞用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养种板, 细胞贴壁后加入雌激素受体阻断剂(1 μmol/L)或P38 MAPK阻断剂SB203580(50 μmol/L)预处理1 h后, 加入SSd(5 μmol/L)或雌二醇(1 μmol/L)孵育24 h. 采用ELISA法检测细胞培养上清液中的一型胶原(collagen type 1, COL-1)、MMP-1、TIMP-1的含量, Western blot法检测细胞MMP-1、TIMP-1、P38、PP38的表达.

结果: 与对照组(Control)比较, SSd、E2单独给药组COL-1(140.95±12.14, 143.58±4.81 vs 198.98±15.08)、TIMP-1(0.23±0.01, 0.21±0.01 vs 0.31±0.01)、P-P38(0.51±0.14, 0.52±0.12 vs 1.00+0.11)明显降低(P<0.01), MMP-1明显升高(0.0127±0.0008, 0.0116±0.0004 vs 0.0049±0.0001, P<0.01). 抑制剂组COL-1、TIMP-1、P-P38较SSd、E2单独给药组明显升高(P<0.01), MMP-1明显降低(P<0.01). 我们采用P38阻断剂SB203580处理细胞, 药物作用24 h后, SB203580组与对照组相比, MMP-1蛋白表达明显增高(3.58±0.35 vs 1.00±0.15, P<0.01), TIMP-1蛋白表达明显降低(0.52±0.14 vs 1.00±0.18, P<0.05).

结论: SSd能够通过ERβ介导的效应抑制P38 MAPK的激活, 进而调节其下游的MMP-1、TIMP-1的表达, 促进细胞外基质的降解, 达到抗纤维化的作用.

Keywords: 柴胡皂苷d; 肝纤维化; 肝星状细胞; 雌激素受体

核心提示: 本研究探讨了柴胡皂苷d(saikosaponin-d, SSd)对活化HSC-T6细胞内基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase-1)、基质金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase-1)表达的影响及其与P38/MAPK信号通路的关联, 并引入雌激素受体阻断剂, 进一步发掘SSd药理作用的受体机制. 确立了SSd的类雌激素样作用, 为临床应用SSd替代雌激素治疗肝纤维化提供了理论依据.