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世界华人消化杂志. 2016-12-08; 24(34): 4562-4567
Published online 2016-12-08. doi: 10.11569/wcjd.v24.i34.4562
Published online 2016-12-08. doi: 10.11569/wcjd.v24.i34.4562
应用改良的组织块酶消化法体外培养人大肠癌原代细胞
梁剑华, 昆明理工大学医学院 云南省昆明市 650504
郭强, 云南省第一人民医院(昆明理工大学附属医院)消化科 云南省昆明市 650032
梁剑华, 张雯, 唐慧, 云南省第一人民医院(昆明理工大学附属医院)临床基础医学研究所 云南省昆明市 650032
梁剑华, 在读硕士, 主要从事肿瘤免疫与消化系肿瘤机制的研究.
作者贡献分布: 此课题由唐慧设计; 研究经费由唐慧与郭强提供; 研究过程由梁剑华与张雯操作完成; 数据分析由梁剑华完成; 本论文写作由梁剑华完成.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, Nos. 81260323, 81460463, 81502556 ; 云南省中青年学术技术带头人后备人才培养基金资助项目 , No. 2013HB083 .
通讯作者: 唐慧, 副教授, 650032, 云南省昆明市西山区金碧路157号, 云南省第一人民医院(昆明理工大学附属医院)临床基础医学研究所. htang1122@aliyun.com
电话: 0871-63390070
收稿日期: 2016-09-07
修回日期: 2016-09-14
接受日期: 2016-10-20
在线出版日期: 2016-12-08
修回日期: 2016-09-14
接受日期: 2016-10-20
在线出版日期: 2016-12-08
Abstract
目的
探讨应用改良的组织块酶消化法体外培养人大肠癌原代细胞的方法.
方法
应用结合组织块法和Ⅳ胶原酶消化法的改良的组织块酶消化法体外原代培养人大肠癌细胞, 通过对培养条件、促进贴壁、控制污染、细胞纯化等方面的探索得到了大肠癌细胞, 并最终用形态学方法(瑞姬氏染色)、和免疫学方法(免疫细胞化学)鉴定所得细胞.
结果
经改良的组织块酶消化法体外培养的人大肠癌原代细胞, 瑞姬氏染色进行细胞形态学鉴定, 结果显示胞核呈紫红色, 核质比明显增大, 符合肿瘤细胞特征; 细胞胃肠癌相关糖链抗原19-9(carbohydrate antigen 19-9, CA19-9)进行细胞免疫学鉴定, 结果显示胞浆呈棕色, 细胞CA19-9阳性.
结论
改良的组织块酶消化法在培养方法改良、促进贴壁、控制污染和去除杂细胞四方面进行了改进, 既可快速获得游离细胞, 又充分利用了未彻底消化的组织块. 采用该改良的组织块酶消化法原代培养细胞成功率高, 所培养的细胞进行初步鉴定证明为大肠癌细胞.
Keywords: 大肠癌; 原代培养; 组织块酶消化法
核心提要: 本研究利用改良的组织块酶消化法体外培养人大肠癌原代细胞, 并通过细胞形态学及细胞免疫学方法鉴定所得细胞.