研究快报
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世界华人消化杂志. 2016-09-08; 24(25): 3705-3711
Published online 2016-09-08. doi: 10.11569/wcjd.v24.i25.3705
Fe-NTA诱导的氧应激通过调节Bcl-2家族蛋白及线粒体膜电位影响人肝星状细胞和肝细胞的凋亡
刘梅, 李树杰, 李阳, 解瑞金, 汲书生
刘梅, 李阳, 解瑞金, 汲书生, 山东省济宁市第一人民医院消化内科 山东省济宁市 272100
李树杰, 山东省济宁市第一人民医院风湿免疫科 山东省济宁市 272100
刘梅, 主治医师, 主要从事肝纤维化及肝炎方面的研究.
作者贡献分布: 此课题由刘梅与李树杰设计; 细胞培养、指标检测由刘梅、李阳及李树杰完成; 数据分析由刘梅与解瑞金完成, 论文写作由刘梅、汲书生及李树杰完成.
通讯作者: 李树杰, 主治医师, 272100, 山东省济宁市健康路6号, 济宁市第一人民医院风湿免疫科. liumei_lsj@163.com
收稿日期: 2016-07-09
修回日期: 2016-07-26
接受日期: 2016-08-07
在线出版日期: 2016-09-08
Abstract
目的

研究Fe-NTA诱导的氧应激对人肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)和人肝细胞凋亡的影响, 并明确其机制与Bcl-2家族蛋白及细胞线粒体膜电位变化的关系.

方法

采用人肝星状细胞株及人肝细胞株张氏肝, 取不同浓度的次氮基三乙酸铁(Fe-NTA)处理产生氧应激, 测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和丙二醛(malondialdehyde, MDA); 用Annexin V-FITC+PI双染色法测定Fe-NTA作用后两种细胞的凋亡率; 用比色法检测细胞内Caspase 3活性的改变; 用阳离子荧光染料JC-1染色, 检测细胞内线粒体膜电位的改变; 用RT-PCR检测抗凋亡基因Bcl-2和凋亡基因Bax的mRNA表达情况; 用免疫印迹技术检测Bcl-2和Bax的蛋白表达情况.

结果

铁负载产生氧应激后, 两种细胞中SOD水平均下降, MDA含量均升高, 与对照组比较有显著差异; Fe-NTa诱导的氧应激不能使HSC发生凋亡, 亦未能使HSC线粒体膜电位下降, 反而使细胞内Caspase 3活性逐渐降低, 抗凋亡基因Bcl-2的mRNA与蛋白表达水平升高, Bax的mRNA与蛋白表达水平降低; Fe-NTa诱导的氧应激使肝细胞发生凋亡增多, 肝细胞内Caspase 3活性逐渐升高, 同时线粒体膜电位下降, 抗凋亡基因Bcl-2的mRNA与蛋白表达水平降低; Bax的mRNA与蛋白表达水平升高.

结论

Fe-NTA诱导的氧应激通过调节Bcl-2家族蛋白及线粒体膜电位影响人肝星状细胞和肝细胞的凋亡, 通过上调Bcl-2表达及下调Bax表达、维持线粒体膜电位不致崩溃、降低Caspase 3活性而抑制肝星状细胞的凋亡, 而对人肝细胞起到相反的作用, 诱导肝细胞凋亡.

Keywords: 肝纤维化; 氧应激; 肝星状细胞; 线粒体膜电位; 凋亡

核心提要: 诱导肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)发生凋亡是肝纤维化治疗的重要方法之一. 本文研究作为肝纤维化的重要发病机制之一的氧应激, 对肝纤维化发生发展的重要细胞- HSC凋亡的影响, 并明确其作用机制.