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世界华人消化杂志. 2016-07-08; 24(19): 2974-2981
Published online 2016-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v24.i19.2974
Published online 2016-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v24.i19.2974
SMO基因siRNA慢病毒表达载体的构建及其对胰腺癌细胞SMO基因表达的影响
迪力夏提•吐尼牙孜, 丁伟, 依马木买买提江•阿布拉, 易超, 新疆医科大学附属肿瘤医院肝胆肿瘤外科 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830011
苏雅婷, 新疆医科大学第五附属医院医务部 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830011
李海军, 深圳市罗湖区人民医院普外科 广东省深圳市 518000
迪力夏提•吐尼牙孜, 主要从事胰腺癌的发生发展机制方面的研究.
作者贡献分布: 迪力夏提•吐尼牙孜参与实验数据收集与论文写作; 依马木买买提江•阿布拉参与实验过程与课题设计; 易超参与课题设计与研究过程; 苏雅婷参与数据分析; 丁伟与李海军负责课题设计.
通讯作者: 李海军, 教授, 主任医师, 518000, 广东省深圳市罗湖区友谊路47号, 深圳市罗湖区人民医院普外科. lhjun3408@163.com
收稿日期: 2016-02-15
修回日期: 2016-05-10
接受日期: 2016-05-16
在线出版日期: 2016-07-08
修回日期: 2016-05-10
接受日期: 2016-05-16
在线出版日期: 2016-07-08
Abstract
目的: Hegdehog信号通路在胰腺癌发生发展过程中发挥着重要的作用, 针对其调控机制的研究将对胰腺癌发病机制的阐明奠定良好的理论基础. 构建携带SMO靶向siRNA慢病毒表达载体, 并证实其对胰腺癌细胞中SMO基因表达的抑制作用.
方法: 设计并合成3条SMO基因靶向siRNA片段, 利用基因重组技术构建携带此3条片段的慢病毒表达载体并测定其滴度, 构建好的慢病毒表达载体转染人胰腺癌细胞株SW1990后, 采用RT-PCR法检测SMO基因的表达以筛选出效果最佳的干扰表达载体, 并以此载体转染SW1990细胞后采用Western blot法检测SMO蛋白表达.
结果: 基因测序与酶切电泳结果提示成功合成SMO靶向siRNA片段且其正确插入慢病毒表达载体, 无碱基缺失错排与突变, 测定病毒滴度分别为5.31×108 TU/mL, 1.49×109 TU/mL及8.50×108 TU/mL, 经转染SW1990细胞后, 测定对SMO基因表达的抑制率分别为86.00%、74.85%及19.22%, 效果最优的干扰表达载体转染SW1990细胞后对SMO蛋白表达的抑制率>80%.
结论: 成功构建携带SMO基因靶向siRNA的慢病毒表达载体, 且该载体可有效抑制胰腺癌细胞中SMO基因的表达, 为进一步的研究提供了良好的实验工具.
Keywords: 胰腺癌; SMO基因; siRNA; 慢病毒表达载体
核心提示: Hegdehog信号通路中的关键成员SMO基因为靶点, 构建携带SMO siRNA的慢病毒表达载体, 为进一步深入分析Hegdehog信号通路在胰腺癌发生过程中的作用与调控机制奠定基础.