Published online 2016-05-08. doi: 10.11569/wcjd.v24.i13.1968
修回日期: 2016-03-29
接受日期: 2016-04-05
在线出版日期: 2016-05-08
目的: 探讨肾上腺髓质素(adrenomedullin, AM)改善溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)大鼠模型肠黏膜通透性的作用机制.
方法: 清洁级♂SD大鼠24只(180-200 g), 随机分成3组: AM组、模型组和正常组, 每组8只. 模型组及AM组均给予TNBS灌肠, 以建立UC大鼠模型. 正常组给予生理盐水灌肠. 造模后注意观察大鼠毛发、活动及大便情况的变化, 记录每组大鼠体质量. 48 h后AM组给予1 mL AM灌肠, 而模型组、正常组则给予1 mL生理盐水灌肠, 连续灌肠7 d后, 腹腔注射10%水合氯醛麻醉大鼠, 留取大鼠血液, 离心后分离上层血清于无菌EP管中冻存, 留取大鼠结肠组织, 部分立即用4%多聚甲醛固定, 余下组织冻存于-80 ℃. HE染色评估大鼠结肠病理变化, Western blot测定肠道黏膜RhoA、Rho激酶1(Rho associated kinase 1, ROCK1)、肌球蛋白轻链激酶(myosin light-chain kinase, MLCK)、核因子-κB(nuclear factor-κB, NF-κB) p65及紧密连接(tight junction, TJ)蛋白Occludin的表达, 酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α, TNF-α), 干扰素-γ(interferon-γ, IFN-γ)表达的水平.
结果: TNBS造模后的大鼠出现腹泻及黏液脓血便, 体质量明显减轻, 肠管扩张, 肠壁变薄, 部分结肠黏膜可见散在溃疡, 与正常组比较, 模型组大鼠血清中TNF-α、IFN-γ的表达明显升高(P<0.05), 结肠组织中RhoA、ROCK1、MLCK及NF-κB p65蛋白的表达显著增高(P<0.05), 而TJ蛋白Occludin的表达较正常组明显降低(P<0.05), 与模型组比较, 给予AM治疗后的大鼠TNF-α、IFN-γ表达降低(P<0.05), 结肠组织中RhoA、ROCK1、MLCK及NF-κB p65蛋白的表达显著下降(P<0.05), 而TJ蛋白Occludin的表达明显升高(P<0.05)有统计学意义.
结论: AM可能通过调节RhoA介导的NF-κB p65/MLCK信号通路, 改善UC肠道黏膜屏障功能.
核心提示: 本研究探讨了肾上腺髓质素(adrenomedullin, AM)对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)大鼠肠黏膜通透性的影响以及RhoA介导的核因子-κB p65/肌球蛋白轻链激酶信号通路在其中的作用, 进一步阐明了AM的作用机制, 为UC的临床治疗提供了新的方向.