黄芩苷抑制肌醇需要蛋白1α过度活化减轻肠缺血再灌注损伤

Abstract

目的: 探讨黄芩苷对肠黏膜上皮细胞肌醇需要蛋白1α的影响, 观察黄芩苷对肠缺血再灌注损伤(intestinal ischemia reperfusion injury, IIRI)的保护作用.

方法: 8 wk, ♂SD大鼠24只, 180-200 g左右, 按随机数字表法分3组: 假手术组(Sham组), 肠缺血再灌注损伤组(I/R组), 黄芩苷预处理组组(黄芩苷+I/R组), 每组8只. Sham组仅开腹关腹. I/R组给予结扎肠系膜上动脉30 min恢复血流再灌注6 h处死, 建立IIRI模型. 黄芩苷+I/R组造模前30 min给予黄芩苷100 mg/kg腹腔注射预处理. 采用ELISA检测小肠组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α, TNF-α)及血浆小肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)的表达, 评价肠组织炎性因子表达水平及肠通透性改变; TUNEL法检测各组肠黏膜上皮细胞凋亡情况; 免疫组织化学检测各组肠黏膜肌醇需要蛋白1α(inositol requiring protein 1α, IRE1α)、磷酸化IRE1α(p-IRE1α)的表达; Western blot检测各组GRP78蛋白表达变化.

结果: I/R组较Sham组肠黏膜p-IRE1α(41.88±3.43 vs 19.55±2.16)及IRE1α(51.3±4.16 vs 9.97±1.34)、肠组织TNF-α(139.70 ng/L±19.72 ng/L vs 16.41 ng/L±1.75 ng/L)、肠黏膜细胞凋亡指数(40.77%±4.70% vs 3.66%±0.83%)、血浆IFABP(2.25 ng/mL±0.27 ng/mL vs 0.63 ng/mL±0.07 ng/mL)均显著升高(P<0.01). 黄芩苷预处理组较I/R组, GRP78(0.61±0.03 vs 0.42±0.02, P<0.01)表达上调, p-IRE1α(26.71±2.43 vs 41.88±3.43)、IRE1α(36.87±2.07 vs 51.3±4.16)表达降低, 肠组织TNF-α(93.38 ng/L±16.79 ng/L vs 139.70 ng/L±19.72 ng/L)及肠黏膜细胞凋亡水平(29.50%±7.66% vs 40.77%±4.70%)、血浆IFABP浓度(1.50 ng/mL±0.29 ng/mL vs 2.25 ng/mL±0.27 ng/mL)均明显降低(P<0.01).

结论: 黄芩苷可通过上调GRP78缓解内质网应激, 抑制IRE1α过度活化, 减轻IIRI炎性反应及细胞凋亡, 保护肠黏膜屏障.

Keywords: 黄芩苷; 肠缺血再灌注损伤; 肌醇需要蛋白1α; 内质网应激

核心提示: 大鼠肠缺血再灌注损伤(intestinal ischemia reperfusion injury, IIRI)诱发过度内质网应激, 诱导内质网感受蛋白肌醇需要蛋白1α(inositol requiring protein 1α, IRE1α)的上调和过度活化介导肠黏膜上皮细胞炎性反应与细胞凋亡, 黄芩苷通过缓解内质网应激, 抑制IRE1α的过表达及活化保护肠黏膜屏障.