基础研究
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世界华人消化杂志. 2016-01-08; 24(1): 10-18
Published online 2016-01-08. doi: 10.11569/wcjd.v24.i1.10
siRNA介导BMP7基因沉默对人肝癌HepG2细胞增殖和迁移的影响
卢燕军, 付陆军, 杨家进, 曾鹏, 蒋为民, 吴建兵
卢燕军, 杨家进, 曾鹏, 蒋为民, 吴建兵, 南昌大学第二附属医院肿瘤科 江西省南昌市 330006
付陆军, 丰城市人民医院肿瘤科 江西省丰城市 331100
卢燕军, 在读硕士, 主要从事肿瘤内科治疗的研究.
基金项目: 江西省科技支撑计划基金资助项目, No. 20111BBG7001.
作者贡献分布: 此课题由卢燕军、曾鹏及吴建兵设计; 研究过程由卢燕军、付陆军、杨家进、曾鹏、蒋为民及吴建兵完成; 数据分析由卢燕军、曾鹏及吴建兵完成; 文章由卢燕军撰写; 吴建兵审阅论文并指导论文修改.
通讯作者: 吴建兵, 教授, 330006, 江西省南昌市民德路1号, 南昌大学第二附属医院肿瘤科. hhgwjb@163.com
电话: 0791-86291950 传真: 0791-86291950
收稿日期: 2015-09-20
修回日期: 2015-11-26
接受日期: 2015-11-30
在线出版日期: 2016-01-08
Abstract

目的: 采用RNA干扰技术(RNA interference, RNAi)抑制骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein 7, BMP7)的表达, 观察BMP7基因沉默对人肝癌HepG2细胞增殖和迁移的影响.

方法: 设计并化学合成针对BMP7的3对小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA), 使用TransLipid® HL Transfection Reagent瞬时转染人肝癌HepG2细胞, 并设正常对照组、Negative-siRNA组及BMP7-siRNA-1、BMP7-siRNA-2、BMP7-siRNA-3转染组. 运用半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)和Western blot法分别从mRNA和蛋白水平检测HepG2细胞中BMP7的表达变化, 选取沉默效果最明显的siRNA片段进行后续实验. 采用MTT比色法及Transwell迁移实验分别检测转染后细胞增殖及迁移的变化, Western blot法检测各组细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase3)表达情况, 流式细胞仪检测转染后细胞周期变化.

结果: RT-PCR和Western blot结果显示, BMP7-siRNA-3转染组BMP7抑制效果最明显(P<0.01), 选取BMP7-siRNA-3转染组进行后续实验. MTT比色法显示, 转染后48, 72 h细胞生长增殖均受到抑制(P<0.01). Transwell迁移实验显示, 转染24 h后, BMP7-siRNA-3转染组HepG2细胞穿膜数均明显低于正常组和Negative-siRNA组(P<0.01). Western blot检测发现BMP7-siRNA-3组比对照组的细胞凋亡相关蛋白Bax、Caspase3表达增加(P<0.01), Bcl-2表达差异无统计学意义. 流式细胞仪检测发现转染后48 h, BMP7-siRNA-3组HepG2细胞被阻滞在G2期(P<0.01).

结论: siRNA介导BMP7基因沉默对人肝癌HepG2细胞的增殖与迁移具有抑制作用, 对细胞凋亡有促进作用, 并可阻滞细胞在G2期.

Keywords: 小干扰RNA; 骨形态发生蛋白7; 肝癌; 增殖和迁移

核心提示: 骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein 7, BMP7)可促进人肝癌HepG2细胞的增殖与迁移, 小干扰RNA(small interfering RNA)介导BMP7基因沉默对其具有抑制作用, 可促进细胞凋亡, 并阻滞细胞在G2期. BMP7或许可以成为肝癌基因治疗的一个新靶点.