基础研究
Copyright ©The Author(s) 2015. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2015-12-18; 23(35): 5597-5605
Published online 2015-12-18. doi: 10.11569/wcjd.v23.i35.5597
HDAC3缺失抑制小鼠肝再生并引起肝细胞凋亡
张蕾, 卢徐锋, 纪洪杰, 周永杰, 武振汝, 李丽, 陈菲, 步宏, 石毓君
张蕾, 卢徐锋, 纪洪杰, 周永杰, 武振汝, 李丽, 陈菲, 石毓君, 四川大学华西医院卫生部移植工程与移植免疫重点实验室 四川省成都市 610041
张蕾, 卢徐锋, 纪洪杰, 周永杰, 武振汝, 李丽, 陈菲, 步宏, 石毓君, 四川大学华西医院病理研究室 四川省成都市 610041
步宏, 四川大学华西医院病理科 四川省成都市 610041
张蕾, 硕士, 主要从事肝再生和肿瘤的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 81472303.
作者贡献分布: 此课题由石毓君设计; 研究过程由张蕾、卢徐锋、武振汝、李丽及陈菲操作完成; 数据分析由纪洪杰与周永杰完成; 本论文写作由张蕾、石毓君及步宏完成.
通讯作者: 石毓君, 研究员, 博士生导师, 610041, 四川省成都市国学巷37号, 四川大学华西医院病理研究室. shiyujun@scu.edu.cn
收稿日期: 2015-10-17
修回日期: 2015-11-12
接受日期: 2015-11-17
在线出版日期: 2015-12-18
Abstract

目的: 检测组蛋白去乙酰化酶3(histone deacetylases 3, HDAC3)的缺失对部分肝切除(partial hepatectomy, PH)后肝细胞的增殖、细胞周期和凋亡的影响.

方法: 通过HDAC3flox/flox小鼠和他莫昔芬(tamoxifen, TAM)诱导的ALB-CREERT工具鼠杂交, 获得TAM诱导肝脏中HDAC3敲除小鼠(ALB-CREERTHDAC3flox/flox mice). Western blot和组织学分析分别检测TAM诱导的ALB-CREERTHDAC3flox/flox小鼠肝脏中HDAC3的敲除效率以及组织学改变. 通过70% PH构建肝再生模型, 并在相应时间点取材. 溴脱氧尿苷(5-Bromo-2-deoxyuridine, BrdU)掺入实验和Ki67免疫组织化学染色评估肝细胞增殖情况. Western blot检测细胞周期蛋白(cyclins)和细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent-kinases, CDKs)的表达水平. 原位缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL)和凋亡标志物Cleaved Caspase3蛋白表达水平反映肝细胞的凋亡.

结果: TAM诱导的ALB-CREERTHDAC3flox/flox小鼠(HDAC3△小鼠)肝脏中HDAC3表达水平显著降低, 但其肝脏结构和代谢并不发生明显改变. BrdU和Ki67免疫组织化学染色结果显示70% PH后36 h和48 h肝细胞增殖率明显降低. Western blot显示HDAC3△小鼠cyclin B和cyclin D表达水平显著降低而CDK2和CDK4的表达水平无显著差异, 组织学及Western blot均提示肝再生期间肝细胞凋亡增多.

结论: HDAC3在小鼠肝再生中起至关重要的作用, HDAC3的缺失抑制肝再生并引起肝细胞凋亡.

Keywords: 蛋白去乙酰化酶3; 肝再生; 细胞周期; 凋亡

核心提示: 本研究通过构建组蛋白去乙酰化酶3(histone deacetylases 3, HDAC3)可诱导条件性敲除小鼠, 采用70%肝切除模型研究肝再生, 检测HDAC3缺失与细胞周期及细胞凋亡的关系, 从而研究HDAC3缺失对小鼠肝再生和肝细胞凋亡的作用.