临床研究
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世界华人消化杂志. 2015-11-18; 23(32): 5148-5156
Published online 2015-11-18. doi: 10.11569/wcjd.v23.i32.5148
原发性肝癌患者血清中miR-21和miR-1247-5p的表达检测
张议心, 王利新, 李元杰, 徐广贤
张议心, 李元杰, 徐广贤, 宁夏医科大学检验学院 宁夏回族自治区银川市 750004
王利新, 徐广贤, 宁夏医科大学总医院医学实验中心 宁夏回族自治区银川市 750004
张议心, 在读硕士, 主要从事临床检验诊断学专业方面的研究.
基金项目: 宁夏自然科学基金资助项目, No. NZ-13149; 宁夏科技支撑计划基金资助项目, No. 宁科计字[2013]20号.
作者贡献分布: 课题的数据分析、论文写作、研究过程由张议心完成; 收集样本以及试剂的提供由王利新与徐广贤完成; 课题的设计由徐广贤与李元杰完成.
通讯作者: 徐广贤, 教授, 硕士生导师, 750004, 宁夏回族自治区银川市兴庆区胜利南街692号宁夏医科大学双怡校区, 宁夏医科大学检验学院, 宁夏医科大学总医院医学实验中心. 599040064@qq.com
收稿日期: 2015-09-09
修回日期: 2015-10-10
接受日期: 2015-10-19
在线出版日期: 2015-11-18
Abstract

目的: 检测原发性肝癌患者血清中miR-21和miR-1247-5p表达水平的变化, 探讨miR-21和miR-1247-5p在原发性肝癌中筛查以及诊断的意义.

方法: 收集临床确诊为原发性肝癌患者的血清样本41例, 并且收集同时期的健康体检人群血清样本41例, 提取血清中的miRNA,利用相应特异的颈环反转录引物, 反转录成cDNA, 同时构建内参U6, 以及miR-21、miR-1247-5p的T载体, 以此来绘制标准曲线, 运用双标准曲线法进行相对定量分析. 利用实时定量PCR(real-time quantitative PCR, qRT-PCR)检测miR-21和miR-1247-5p的表达量.

结果: qRT-PCR检测结果显示, 与健康对照组相比, 在原发性肝癌患者的血清中, miR-21表达量显著上调(P<0.05), miR-1247-5p表达量显著下调(P<0.05). 并且通过统计学软件分析, miR-21、miR-1247-5p与甲胎蛋白之间无相关性(P>0.05).

结论: 与健康对照人群相比, 原发性肝癌患者血清中miR-21和miR-1247-5p表达有显著性变化, 血清中的miR-21和miR-1247-5p可能为原发性肝癌的诊断提供种新的生化补充指标.

Keywords: 小分子RNA; 实时定量PCR; 原发性肝癌

核心提示: 通过收集临床原发性肝癌以及同时期健康人群的血清样本, 提取样本中miRNA, 通过实时定量PCR的检测, 发现miR-1247-5p在肝癌中低表达, 联合已有在大肠癌和胰腺癌中的报道, 表明其可能起着抑癌基因的作用. 另检测发现miR-21在肝癌中高表达, 故miR-21可作为一个阳性参照miRNA, 与低表达的miR-1247-5p作为两种诊断标志物, 期望作为诊断肝癌的miRNA的组合. 联合现有的检测肝癌的血清学标志物甲胎蛋白等, 对肝癌患者进行联合辅助诊断.