研究快报
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世界华人消化杂志. 2015-10-18; 23(29): 4687-4693
Published online 2015-10-18. doi: 10.11569/wcjd.v23.i29.4687
CRISPRi在体抑制肝脏miR-122的表达
赵洪礼, 杨景玉, 李桂玲, 毛德华, 李洪运
赵洪礼, 杨景玉, 李桂玲, 毛德华, 山东省消化系统疾病防治中心, 山东省医学科学院第三附属医院消化内科 山东省济宁市 272033
李洪运, 济宁市第一人民医院消化内科 山东省济宁市 272033
赵洪礼, 在读博士, 主要从事消化系统疾病的防治性研究.
作者贡献分布: 主要试验、资料分析及文章撰写由赵洪礼完成; 数据统计由杨景玉、李桂玲及毛德华完成; 研究设计、文章修改及审阅由李洪运、赵洪礼及杨景玉完成.
通讯作者: 李洪运, 副主任医师, 272033, 山东省济宁市任城区健康路11号, 济宁市第一人民医院消化内科. xhlhy2008@163.com
电话: 0537-2253700
收稿日期: 2015-08-04
修回日期: 2015-09-02
接受日期: 2015-09-11
在线出版日期: 2015-10-18
Abstract

目的: 探索CRISPR干扰(CRISPR interference, CRISPRi)能否实现在体抑制肝脏miR-122表达.

方法: 针对miR-122启动子区设计sgRNA(sgT1和sgT2), 并分别将其与无DNA切割活性仅保留识别活性的dCas9-KRAB载体通过尾静脉流体力学法注射到8-10 wk龄小鼠, 注射1、2、4 wk后通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)方法检测肝脏mmu-miR-122的表达; 设计不同的sgRNA浓度梯度, 探索CRISPRi在体抑制肝脏miR-122表达是否存在剂量依赖性; 通过qRT-PCR及Western blot方法检测肝脏miR-122靶分子HOMX1和Cyclin G1的表达变化.

结果: 在注射1 wk和2 wk后, sgT1介导的CRISPRi在体抑制肝脏miR-122的表达水平分别为23%(P<0.05)和16%(P<0.05); 随sgRNA的剂量升高, 肝脏miR-122表达降低, 当lentiGuide-Puro-sgT1质粒为120 μg时, 可将miR-122的表达抑制约30%; CRIPSRi在体抑制肝脏miR-122表达的同时, 上调了miR-122下游靶分子HMOX1和Cyclin G1的表达.

结论: 本研究利用CRISPRi实现了在体抑制肝脏miR-122的表达, 为抗丙型肝炎病毒(hepatitis C virus)的在体治疗提供了新的策略.

Keywords: CRISPRi; 在体基因修饰; miR-122; 肝脏

核心提示: 本研究利用CRISPRi在体特异性抑制肝脏miR-122的表达, 上调了下游靶分子HMOX1和Cyclin G1的表达, CRISPRi介导的在体基因修饰为抗丙型肝炎病毒(hepatitis C virus)提供了全新的策略.