临床研究
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世界华人消化杂志. 2015-10-08; 23(28): 4507-4514
Published online 2015-10-08. doi: 10.11569/wcjd.v23.i28.4507
一种检测肝螺杆菌套式PCR方法的建立及临床应用
秦和平, 毕丽红, 韦碧柳, 潘信义, 叶安丽, 易平
秦和平, 韦碧柳, 潘信义, 叶安丽, 柳州市人民医院医疗保健部 广西壮族自治区柳州市 545006
毕丽红, 南方医科大学附属南方医院消化内科 广东省广州市 510515
易平, 柳州市人民医院消化内科 广西壮族自治区柳州市 545006
秦和平, 主治医师, 主要从事螺杆菌的研究.
基金项目: 广西省卫生厅基金资助项目, No. Z2013651.
作者贡献分布: 本文由易平设计; 秦和平负责引物的设计、实验操作、数据分析及论文撰写; 毕丽红负责部分实验操作及数据分析; 韦碧柳、潘信义及叶安丽负责部分文献查找与论文写作.
通讯作者: 易平, 主任医师, 545006, 广西壮族自治区柳州市文昌路8号, 柳州市人民医院消化内科. yipinglz@126.com
电话: 0772-2663532
收稿日期: 2015-07-16
修回日期: 2015-09-04
接受日期: 2015-09-11
在线出版日期: 2015-10-08
Abstract

目的: 建立一种敏感性高、特异性强的检测肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus, H. hepaticus)的套式PCR方法并对其临床应用进行探讨.

方法: 本研究基于9种H. hepaticus亚种的16S rRNA基因设计筛选出1套套式引物(2条内引物、2条外引物), 优化反应条件后, 通过模拟粪便和胆汁标本、相关细菌、动物模型标本和临床标本的检测对该套式PCR方法的敏感性、特异性进行评估.

结果: 在模拟粪便和胆汁标本中, 该方法检测H. hepaticus的最低检出浓度达到102 CFU/mL. 幽门螺杆菌、胆螺杆菌、空肠弯曲菌、大肠埃希菌、粪肠球菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌检测结果均为阴性. 本研究建立了3例感染肝螺杆菌的SPF级Balb/c小鼠模型. 该方法在3例模型的粪便和盲肠标本及2例模型的肝脏标本中检测出H. hepaticus. 10例胆石病患者中, 该法在2例患者的胆囊胆汁、胆囊黏膜和粪便标本中检测出有H. hepaticus临床标本的检测中, PCR检测方法、医疗干预和标本的类型及处理可能都会影响检测的结果.

结论: 本研究建立的套式PCR方法, 敏感性高、特异性强, 可以用于小鼠和人的H. hepaticus感染. H. hepaticus感染可能和人胆石病有关. PCR检测方法、医疗干预和标本的类型及处理可能都会影响临床标本的检测结果.

Keywords: 肝螺杆菌; 套式PCR; 16S rRNA; 临床应用

核心提示: 本文的创新有3点: (1)建立了一条不断建立PCR新方法的途径(综合利用RDP数据库、DNAMAN8.0、Primer Primier 6.0和OLIGOU7.0软件设计引物、动物模型及临床标本检测该方法); (2)建立了一种新的检测肝螺杆菌的套式PCR方法; (3)对该法的临床应用进行了初步研究.