干扰HSF2对THP-1细胞NLRP3炎症复合体的影响

Abstract

目的: 通过慢病毒-热休克转录因子2-RNA干扰(lentivirus-heat shock transcription factor 2-RNA interference, LV-HSF2-RNAi)人巨噬细胞系(THP-1), 探讨HSF2对THP-1细胞NOD样受体3(NOD-like receptor family, pyrin domain containing 3, NLRP3)炎症复合体及其下游白介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)的影响.

方法: 选用THP-1作为研究对象, 使用慢病毒(LV-HSF2-RNAi)转染THP-1, 干扰其HSF2表达, 使用佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA)诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞; 将细胞分为对照组与转染组, 使用脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)刺激细胞; 凝胶电泳PCR检测细胞NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis associated speck- like protein containing a CADR domain, ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(cysteine-requiring aspartate protease-1, Caspase1)、IL-1β mRNA表达; 蛋白质免疫印迹实验(Western blot)检测细胞NLRP3、ASC、Caspase1、IL-1β蛋白表达; 酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养基内IL-1β水平.

结果: Western blot检测HSF2干扰组中HSF2蛋白表达明显低于未转染组和阴性对照组(P<0.05); PMA诱导THP-1细胞分化, LPS刺激后, 干扰组NLRP3、ASC、Caspase1、IL-1β mRNA及蛋白表达水平明显高于对照组及干扰对照组(P<0.05); HSF2干扰组IL-1β表达水平明显高于未转染组及阴性对照组(538.800 pg/mL±52.250 pg/mL vs 257.010 pg/mL±26.148 pg/mL, 238.231 pg/mL±29.245 pg/mL, P<0.05).

结论: 干扰HSF2可以明显提高THP-1细胞NLRP3炎症复合体活化水平, 提高IL-1β水平.

Keywords: 热休克转录因子2; 慢病毒RNA干扰; THP-1细胞; NLRP3炎症复合体; 炎症因子

核心提示: 前期研究提示热休克转录因子2(heat shock transcription factor 2, HSF2)可能参与溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)发生、发展, NLRP3炎症复合体与UC关系密切, 目前国内外暂无HSF2与NOD样受体3(NOD-like receptor family, pyrin domain containing 3, NLRP3)炎症复合体间关系的研究, 本研究发现低水平HSF2可以促进NLRP3炎症复合体在THP-1细胞内的表达, 促进炎症反应.