研究快报
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世界华人消化杂志. 2015-08-18; 23(23): 3742-3748
Published online 2015-08-18. doi: 10.11569/wcjd.v23.i23.3742
CRISPRi靶向调控HCV复制相关miR-122的表达
赵洪礼, 李洪运, 毛德华, 李桂玲, 黄勇
赵洪礼, 毛德华, 李桂玲, 黄勇, 山东省消化系统疾病防治中心 山东省济宁市 272033
李洪运, 济宁市第一人民医院消化内科 山东省济宁市 272033
赵洪礼, 在读博士, 主要从事消化系统疾病的防治性研究.
作者贡献分布: 赵洪礼与李洪运对此文所作贡献均等; 主要试验、资料分析及文章撰写由赵洪礼与李洪运完成; 数据统计由毛德华与李桂玲完成; 研究设计、文章修改及审阅由黄勇、赵洪礼及李洪运完成.
通讯作者: 黄勇, 研究员, 272033, 山东省济宁市任城区太白楼中路11号, 山东省消化系统疾病防治中心. cjpbhy@163.com
电话: 0537-2609566
收稿日期: 2015-05-29
修回日期: 2015-07-07
接受日期: 2015-07-14
在线出版日期: 2015-08-18
Abstract

目的: 探索CRISPR干扰(CRISPR interference, CRISPRi)特异性抑制肝癌细胞HepG2内源性miR-122表达.

方法: 设计靶向miR-122启动子区TATA盒和转录起始位点(transcription start site, TSS)的sgRNA(sgT1和sgT2), 与无DNA内切酶活性仅保留识别特性的dCas9-KRAB载体共转染HepG2细胞, 通过实时定量PCR(quantitative Real-time PCR, qRT-PCR)方法检测miR-122的表达并确立有效的sgRNA; 设计不同的sgRNA浓度, 探索CRISPRi抑制作用的剂量依赖性; 通过qRT-PCR及Western blot方法检测miR-122靶分子HOMX1和CyclinG1的表达变化.

结果: sgT1和sgT2介导的CRISPRi分别将肝癌细胞HepG2内源性miR-122的表达水平抑制5.5倍(P<0.01)和3.7倍(P<0.01); CRIPSRi抑制效应是sgRNA剂量依赖性的, 当lentiGuide-Puro-sgT1质粒为500 ng时, 可将miR-122的表达抑制10.0倍(P<0.01); CRIPSRi抑制肝癌细胞HepG2内源性miR-122表达的同时, 上调了miR-122下游靶分子HMOX1和CyclinG1的表达.

结论: 本研究利用CRISPRi技术实现了对肝癌细胞HepG2内源性miR-122表达的特异性抑制, 为抗丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)提供了全新的策略.

Keywords: CRISPR干扰; HepG2; miR-122

核心提示: 利用CRISPR干扰技术实现了对肝癌细胞HepG2内源性miR-122表达的靶向抑制, 并上调了miR-122下游靶分子HMOX1和CyclinG1的表达, 为抗丙型肝炎病毒(hepatitis C virus)提供了全新的策略.