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世界华人消化杂志. 2015-07-08; 23(19): 3022-3028
Published online 2015-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v23.i19.3022
Published online 2015-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v23.i19.3022
表没食子儿茶素没食子酸酯对肝癌HepG2细胞自噬信号的影响及意义
陈丽, 广西医科大学第一附属医院新药研发中心 广西壮族自治区南宁市 530021
叶会兰, 张国, 姚文敏, 陈兴洲, 广西壮族自治区人民医院消化内科 广西壮族自治区南宁市 530021
梁钢, 广西医科大学药学院药理教研室 广西壮族自治区南宁市 530021
陈丽, 主管药师, 主要从事消化系统肿瘤及肾病药理研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, Nos. 81160532, 81172260, 81360077, 81102495.
作者贡献分布: 此课题由梁钢与张国设计; 研究主体过程由陈丽与叶会兰完成; 姚文敏与陈兴洲参与细胞培养、PCR实验; 数据分析、论文撰写由陈丽、张国及叶会兰完成; 论文修改及审阅由梁钢与张国完成.
通讯作者: 梁钢, 教授, 博士生导师, 530021, 广西壮族自治区南宁市双拥路22号, 广西医科大学药学院药理教研室. lianggang22@aliyun.com
电话: 0771-5302271
收稿日期: 2015-04-07
修回日期: 2015-05-14
接受日期: 2015-05-19
在线出版日期: 2015-07-08
修回日期: 2015-05-14
接受日期: 2015-05-19
在线出版日期: 2015-07-08
Abstract
目的: 观察表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-O-gallate, EGCG]作用下肝癌HepG2细胞自噬改变, 探讨其对肿瘤细胞增殖、死亡的影响及意义.
方法: DMEM培养基常规培养HepG2细胞, 分组给予不同浓度EGCG作用. 通过透射电镜观察细胞自噬泡形成、实时定量逆转录PCR及免疫印迹分析自噬相关基因及蛋白分子表达、MTT法测定细胞增殖率以及台盼蓝染色法检测细胞死亡数, 进一步通过自噬干预实验综合判断细胞自噬变化是否参与EGCG的肝癌治疗作用.
结果: EGCG明显抑制HepG2细胞生长, 药物浓度与细胞增殖率呈负相关(r = -0.9341, P<0.001). 在有效抑制细胞增殖的EGCG作用下, HepG2细胞自噬相关基因Beclin1和Atg5的mRNA及蛋白质表达下降, 作用底物P62表达增加, 细胞内自噬泡形成总体减少. 使用Raypamycin上调自噬水平明显削弱EGCG对HepG2细胞的杀伤作用(t = 9.95, P<0.01), 6-氨基-3-甲基嘌呤(3 methyladenine, 3MA)抑制自噬可显著增强药物的杀癌效应(t = 22.82, P<0.01).
结论: EGCG可通过下调肝癌细胞自噬有效抑制癌细胞增殖、促进癌细胞死亡, 是EGCG发挥治疗肝癌作用的重要药理机制.
Keywords: 表没食子儿茶素没食子酸酯; 肝癌; 自噬; 细胞增殖; 药理机制
核心提示: 本研究展示了表没食子儿茶素没食子酸酯可通过下调肝癌细胞自噬有效抑制癌细胞增殖、促进癌细胞死亡, 表现与传统化疗药物诱导自噬、妨碍治疗不同. 本研究所提供的药理机制新信息, 为进一步肝癌治疗研究提供了重要依据.