Published online 2015-04-18. doi: 10.11569/wcjd.v23.i11.1712
修回日期: 2015-02-11
接受日期: 2015-03-06
在线出版日期: 2015-04-18
目的: 研究小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)沉默人胰腺癌Capan-2、PANC-1细胞中叉头框蛋白C1(fork head box C1, FOXC1)基因对胰腺癌细胞增殖能力的影响及作用机制.
方法: 以胰腺癌细胞、原发胰腺癌组织为研究对象, 实时定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测FOXC1 mRNA在胰腺癌细胞及组织中的表达情况; 将人胰腺癌细胞分为2组: FOXC1 siRNA组(实验组)、NC siRNA组(阴性对照组), 脂质体转染法将FOXC1 siRNA转染入胰腺癌细胞, qRT-PCR、Western blot技术检测胰腺癌细胞FOXC1 mRNA及蛋白表达变化, 5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(5-ethynyl-2'-deoxyuridine, EdU)细胞增殖法检测各组胰腺癌细胞增殖情况; 流式细胞技术(flow cytometry, FCM)检测各组胰腺癌细胞的周期分布, Western blot技术分析周期相关蛋白P21、P53、Cyclin D1蛋白表达情况.
结果: qRT-PCR结果提示: 相比正常胰腺上皮细胞和癌旁胰腺组织, FOXC1 mRNA在胰腺癌细胞及胰腺癌组织中表达较高(P<0.05); qRT-PCR及Western blot结果显示FOXC1 siRNA有效沉默了胰腺癌细胞FOXC1基因的转录和表达, EdU细胞增殖实验提示: 沉默了胰腺癌细胞FOXC1基因表达后, 胰腺癌细胞胞的增殖能力明显下降, 较阴性对照组, 差异有统计学意义(P<0.05); FCM结果显示: 沉默了胰腺癌细胞FOXC1基因表达后胰腺癌细胞被阻滞在G0/G1期, 较阴性对照组, 差异有统计学意义(P<0.05); Western blot结果显示: 较阴性对照组, P21、P53表达水平无明显变化, Cyclin D1表达水平下降, 差异有统计学意义(P<0.05).
结论: FOXC1 siRNA能够有效沉默人胰腺癌Capan-2、PANC-1细胞FOXC1基因的表达, 抑制其增殖, 将细胞周期阻滞于G0/G1期, 提示FOXC1影响细胞增殖可能是通过调控细胞周期实现的, 其机制可能是部分通过调控细胞周期蛋白Cyclin D1的表达而实现.
核心提示: 本研究采用小干扰RNA技术, 有效沉默了胰腺癌细胞中转录因子叉头框蛋白C1(fork head box C1, FOXC1)基因表达, 阻滞细胞周期于G0/G1期, 抑制了胰腺癌细胞的增殖, 其机制可能部分通过调控细胞周期蛋白Cyclin D1的表达而实现, 可能为胰腺癌治疗提供参考靶点和理论依据.